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遺伝子発現制御因子のリン酸化による機能調節

研究課題

研究課題/領域番号 02454149
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 医化学一般
研究機関理化学研究所

研究代表者

石井 俊輔  理化学研究所, 分子遺伝学研究室, 主任研究員 (00124785)

研究期間 (年度) 1990 – 1991
研究課題ステータス 完了 (1991年度)
配分額 *注記
6,200千円 (直接経費: 6,200千円)
1991年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
1990年度: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
キーワード転写性御因子 / リン酸化 / Aキナ-ゼ / Cキナ-ゼ / 転写制御因子 / 遺伝子発現 / DNA結合蛋白質
研究概要

私達がcDNAクロ-ニングにより同定したCRE(cAMP response element)結合蛋白質CREーBP1のリン酸化部位と機能ドメインの関連を解析した。まずCREーBP1のcDNAに一連の欠失変異、点変異を導入し、CREーBP1変異体の発現ベクタ-を作製した。これらの発現ベクタ-をCREを持つCATレポ-タ-プラスミドと共に培養細胞にトランスフェクション法で導入し、発現されるCREーBP1変異体の転写活性化能を解析した。その結果、正常CREーBP1はCREを介して転写を活性化する能力を持つこと、転写活性化のためにはN末端付近のメタルフィンガ-構造を含む転写活性化ドメインとC末端付近の活性基性アミノ酸クラスタ-とロイシンジッパ-構造からなるDNA結合ドメインが必要であることが明かとなった。次にcDNAを用いて大腸菌で発現させたCREーBP1を基質としてAキナ-ゼによるリン酸化をin vitroで解析した。その結果、CREーBP1は両キナ-ゼで効率良くリン酸化されることが示された。さらにそのリン酸化部位を決定したところ、Aキナ-ゼは転写活性化ドメイン内の62番目のSer残基を、またCキナ-ゼはDNA結合ドメイン内の340,367番目の2つのSer残基をリン酸化することが明かとなった。このように機能上重要な部位がリン酸化されることが明かとなり、リン酸化による機能制御が強く示唆された。また転写制御因子として機能する核内がん遺伝子産物Mybのリン酸化と転写制御能の関連を解析した。Mybの11,12番目のser残基はカゼインキナ-ゼIIにより効率良くリン酸化されるので、この部位をAlaに変えた変異体の転写活性化能を解析したところ、約50〜100%の上昇が見られた。今後いろいろな条件下でさらに検討することが必要である。

報告書

(3件)
  • 1991 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (24件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (24件)

  • [文献書誌] Ishii Shunsuke: "Structure and function of the protein CRE-BP1:heterogeneity of the protein that binds to the cAMP-responsive element" Adv.in Second Messenger and Phosphoprotein Res.24. 335-341 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakagoshi Hideki: "Binding of the C-myb proto-oncogene product to the simian virus 40 enhancer stimulates transciption" J.Biol.Chem.265. 3479-3483 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanei-Ishii Chie: "The tryptophan cluster:a hypothetical structure of the DNA-binding domain of the myb proto-oncogene product" J.Biol.Chem.265. 1990-19995 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuda shinji: "Identification of the functional domains of the transcriptional regulator CRE-BP1" J.Biol.Chem.266. 18188-18193 (1991)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zu You-Li: "Complete putative metal finger and leucine zipper structures of CRE-BP1 are required for the E1A-induced trans-activation." J.Biol.Chem.266. 24134-24139 (1991)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakurai Atushi: "Phosphorylation of cAMP response element-binding protein,CRE-BP1,by cAMP-dependent protein kinase and Protein kinase C." Biochem.Biophys.Res.Commun.181. 629-635 (1991)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ishii Shunsuke: "Structure and function of the protein CRE-BP1 : heterogeneity of the protein that binds to the cAMP-responsive element." Adv. in Second Messenger and Phosphoprotein Res.24. 335-341 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakagoshi Hideki: "Binding of the c-myb proto-oncogene product to the simian virus 40 enhancer stimulates transciption." J. Biol. Chem.265. 3479-3483 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kanei-Ishii Chie: "The tryptophan cluster : a hypothetical structure of the DNA-biinding domain of the myb proto-oncogene product." J. Biol. Chem.265. 19990-19995 (1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuda Shinji: "Identification of the functional domains of the transcriptional regulator CRE-BP1." J. Biol. Chem.266. 18188-18193 (1991)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Zu You-Li: "Complete putative metal finger and leucine zipper structures of CRE-BP1 are required for the E1A-induced trans-activation." J. Biol. Chem.266. 24134-24139 (1991)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakurai Atushi: "Phosphorylation of cAMP response element-binding protein, CRE-BP1, by cAMP-dependent protein kinase and protein kinase C." Biochem. Biophys. Res. Commun.181. 629-635 (1991)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuda Shinji: "identification of the functional domains of the transcriptional regulator CRE-BP1" J.Biol.Chem.266. 18188-18193 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Zu You-Li: "Complete putative metal finger and leucine zipper strctures of CRE-BP1 are required for the E1A-induced trans-activation." J.Biol.Chem.266. 24134-24139 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Sakurai Atushi: "Phosphorylation of cAMP response element-binding protein,CRE-BP1,by cAMP-dependent protein kinase and protein kinase C." Biochem.Biophys.Res.Commun.181. 629-635 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Kanei-Ishii Chie: "Transactivation and transformation by Myb are negatively regulated by a leucine zipper structure" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Ogata Kazuhiro: "Solution structure of a DNA-binding unit of Myb:a helix-turn-helix-related motif with conserved tryptophans forming a hydrophobic core." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Ramsay Robert G.: "Interaction of the Myb protein with specific DNA binding sites." J.Biol.Chem.227. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Nakagoshi Hideki: "Binding of cー<myb>___ー protoーoncogene product to the simian virus 40 enhancer stimulates transcription." J.Biol.Chem.265. 3479-3483 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] KaneiーIshii Chie: "The tryptophan claster:a hypothetical structure of the DNAーbinding domain of <myb>___ー protoーoncogene product" J.Biol.Chem.265. 19990-19995 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Mizuguchi Gaka: "DNA binding activity and transcriptional activator function of human Bー<myb>___ー protein compared with cーMyb" J.Biol.Chem.265. 9280-9284 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Nagase Takahiro: "Promoter region of the human CREーBP1 gene encoding the transcriptional regulator binding to the cyclic AMP response element" J.Biol.Chem.265. 17300-17306 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Ishii Shunsuke: "Structure and function of the protein CREーBP1:Heterogeneity of the protein that binds to the cAMPーresponsive element" Adv.in Second Messenger and Phosphoprotein Res.24. 335-339 (1990)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Maekawa Toshio: "CREーbinding protein,CREーBP1,mediates the E1Aーinduced but not the Taxーinduced <trans>___ーーactivation" Oncogene. 5. (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書

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公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

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