| 研究課題/領域番号 |
02454164
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
実験病理学
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| 研究機関 | 旭川医科大学 |
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研究代表者 |
小川 勝洋 旭川医科大学, 医学部, 教授 (50045514)
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| 研究分担者 |
太田 知明 旭川医科大学, 医学部, 助手 (50233135)
西川 祐司 旭川医科大学, 医学部, 助手 (90208166)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
1992年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1991年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1990年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
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| キーワード | albumin遺伝子 / 肝発癌 / 癌遺伝子 / 分離肝細胞 / 肝細胞移植 / 無アルブミンラット / トランスフェクション / スフェロイド培養 / アルブミンプロモ-タ- / Adenovirus E1A / 肝細胞 / Adenovirus ElA / トランスジェニックマウス |
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| 研究概要 |
albumin遺伝子が肝細胞で特異的に発現するのは、albumin遺伝子のpromoter領域に肝細胞特異的な転写因子が働くためである。本研究はalbumin promoterを癌遺伝子に結合して肝細胞に導入後、肝内に移植することにより肝細胞を癌化させる発癌モデルを確立することを目的とした。実験は以下の点に分けて行った。
1)albumin promoter領域の470baseをPCRにて増幅し、これをpUCE1Aに組み込み、pAlbE1A vectorを作製した。これをラット分離肝細胞及び不死化マウス肝細胞にtransfectしたところ、E1A mRNA及び蛋白が、transientに発現することが認められた。
2)retroviral vector法により分離肝細胞に遺伝子導入するために、β-gal遺伝子をreporterとするpMNSM-Tk-lac Z vectorを作製し、これをPA317 amphotropic packaging cell lineにtranfectしてレトロウィル粒子に封入した。これをnewborn ratの分離肝細胞に感染させたところ、効率よく導入できることが明らかになった。
3)肝臓内に分離肝細胞を移植する系を確立するためにcongenic無アルブミンラットの肝内にF344ラットの分離肝細胞を注入た。生着率はalbumin陽性細胞数、RT-PCR法によるalbumin mRNA、血清albuminの上昇をマーカーとして検討したところ、donor肝細胞は宿主肝細胞1000個に対して約1個の割合で生着することが確認された。
4)in vitroで遺伝子操作を加えた細胞を生体内に戻すことができるか否かを検討した。培養細胞を回収しやすくするためにspheroid培養を行い、これを肝内または脾内に移植したところ、生着し、生常の肝細胞の機能と形態を回復することが確認された。また、in vitroでretro-viral vectorをtransfectした肝細胞は短期間であるが、脾内に生着し、transgeneを発現することが確認された。
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