| 研究課題/領域番号 |
02454184
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
ウイルス学
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| 研究機関 | 国立予防衛生研究所 |
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研究代表者 |
武田 直和 国立予防衛生研究所, 感染症疫学部, 室長 (90132894)
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| 研究分担者 |
山崎 修道 国立予防衛生研究所, 副所長 (20072902)
宮村 紀久子 国立予防衛生研究所, 感染症疫学部, 室長 (40072897)
谷村 雅子 国立小児病院, 小児生態部, 研究員 (90014191)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1991年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | ピコルナウイルス / エンテロウイルス70 / 分子進化 / 分子系統樹 / 塩基置換 / レセプター / コクサッキ-ウイルスA24変異株 / 塩基配列 |
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| 研究概要 |
RNAウイルスの遺伝子は一般のDNA遺伝子に比べて約100万倍の高速で進化する。この高い進化速度はヒトに病原性をもつ新しいウイルスの誕生と消失に密接にかかわっていると考えられる。本研究は分子進化系統樹上の存続と断絶を、レセプター結合領域の分子変異の面から追跡し、レセプターとの相互関係を分子レベルで解明することを目的とした。
エンテロウイルス70(EV70)分離株約20株のゲノムRNAについてVP1(918塩基)の塩基配列を解読し、詳細な分子系統樹を作製した。各分離株の系統関係とこれに伴う塩基置換およびアミノ酸変異パターンを解析し、原型ウイルスが持っていたであろう塩基配列を推定した。分離株の塩基置換パターンを分子系統樹上に重ね合わせることにより、各分離株がどのような塩基置換を伴って分岐してきたかを明確に示すことができた。この解析で算出された塩基置換速度がエンテロウイルス遺伝子に普遍的な値であるのかどうかを確認するため、もうひとつの急性出血性結膜炎の病因ウイルスであるコクサッキーウイルスA24型変異株(CA24v)を用い解析を進めた。CA24v分離株44株の3Cプロテアーゼ領域(549塩基)の塩基配列を解読した。平行置換および復帰置換などの重複置換を補正した後の置換速度は、EV70で5.0x10^<-3>/座位/年、CA24vのそれは4.9x10^<-3>/座位/年と計算された。異なるウイルスの異なる領域間の比較であるにもかかわらず極めて類似の値を取ることが明らかになった。
一方、EV70レセプター遺伝子のクローニングと同定に成功した。EV70感受性細胞表面に結合しウイルス感染阻止能を持つモノクローン抗体を作出し、真核細胞発現ベクターでHeLa細胞mRNAのライブラリーを作製後、パンニング法で発現クローンを選択した。本レセプター分子は細胞表面上にあって、免疫に関連した蛋白の発現制御に関与する蛋白と同じ塩基配列を持っていた。
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