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プロテインキナ-ゼCの特異的分子種発現細胞の構築・応用と選択的制御剤の開発研究

研究課題

研究課題/領域番号 02557015
研究種目

試験研究(B)

配分区分補助金
研究分野 医化学一般
研究機関神戸大学

研究代表者

深見 泰夫  神戸大学, 遺伝子実験施設, 助教授 (00156746)

研究分担者 橘 秀樹  神戸大学, 理学部, 助教授 (70126118)
荻田 浩司  神戸大学, 医学部, 助手 (60204103)
吉川 潮  神戸大学, 医学部, 講師 (40150354)
研究期間 (年度) 1990 – 1991
研究課題ステータス 完了 (1991年度)
配分額 *注記
6,600千円 (直接経費: 6,600千円)
1991年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1990年度: 4,400千円 (直接経費: 4,400千円)
キーワードプロテンキナ-ゼC / 蛋白質リン酸化反応 / 生理活性物質 / 情報受容機構 / cDNA / 発現細胞系 / プロテインキナ-ゼC / 蛋白質リン酸化酵素 / 触媒機能
研究概要

本研究では、プロテインキナ-ゼC(PKC)ファミリ-に焦点をあて、以下の諸点の試験的解析を行なうことを目的とした。1.PKCの分子種特異的活性調節物質の開発。2.分子種特異的活性調節物質のPKCの特異的分子種発現細胞への応用。3.上記細胞系を用いた受容応答機構の解析。
これらの解析を行なうには、PKC各分子種の分離・精製が必須であるが、本研究以前には、α,β,γ種の3種が分離・精製されているだけであった。このため本研究ではまず、これまでにcDNAがクロ-ニングされているPKC分子種の内、まだ組織からの分離に成功していない3つの分子種(δ,ε,ζ)について、酸素の分離・精製と分離された酸素の諸性質の解析を行なった。材料としてはラットの脳を用い、対照としてδ,ε,ζそれぞれのcDNAをCOSー7細胞に導入し発現させたものを用いた。また、酵素蛋白質の同定のため、それぞれの分子種に特異的な抗ペプチド抗体を作成した。その結果、これらの3種のPKCを分離・同定すると共に、種々の活性調節物質による活性化のパタ-ンの違い、基質特異性の違い、蛋白質の組織分布の違い、等を明かにすることができた。さらに、各PKC分子種を介した受容応答機構の解析に向けて2つの方向からのアプロ-チを試みた。1つは酵母の系であり、もう1つはアフリカツメガエル卵母細胞の系である。いずれの系も細胞分裂・細胞周期の制御においてPKCの関与がある程度明かになっている系であるが、これまでに酵素の単離がなされていなかったものである。これらの材料からもPKC分子種を単離し、その性質を明かにすることができたので、今後、酵母や卵母細胞での情報受容応答機構の解析と、細胞分裂・細胞周期の制御におけるPKCの役割の解明に役立つものと思われる。

報告書

(3件)
  • 1991 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (35件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (35件)

  • [文献書誌] Ito,A.,Saito,N.,Hirata,M.,Kose,A.,Tsujino,T.,Yoshihara,C.,Ogita,K.,Kishimoto,A.,Nishizuka,Y.,and Tanaka,C.: "Immunocytochemical localization of the α subspecies of protein kinase C in rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 3195-3199 (1990)

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  • [文献書誌] Ogita,K.,Miyamoto,S.,Koide,H.,Iwai,T.,Oka,M.,Ando,K.,Kishimoto,A.,Ikeda,K.,Fukami,Y.,and Nishizuka,Y.: "Protein kinase C in Sacharomyces cerevisiae,comparison with the mammalian enzyme" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 5011-5015 (1990)

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  • [文献書誌] Bignon,E.,Ogita,K.,Kishimoto,A.,and Nishizuka,Y.: "Protein kinase C subspecies in estrogen receptor-positive and -negative human breast cancer cell lines." Biochem.Biophys.Res.Commun.171. 1071-1078 (1990)

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  • [文献書誌] Sato,K.-I.,Miki,S.,Tachibana,H.,Hayashi,F.,Akiyama,T.,and Fukami,Y.: "A synthetic peptide corresponding to residues 137 to 157 of p60^<v-src> inhibits tyrosine-specific protein kinases." Biochem.Biophys.Res.Commun.171. 1152-1159 (1991)

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  • [文献書誌] Tachibana,H.,Sasaki,Y.,Sawano,H.,and Kitakawa,M.: "An'Initiatior-terminator vector'suitable for direct expression of genetic segments in Escherichia coli." Protein Engineering. 3. 371 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sahara,S.,Sato,K.-I.,Aoto,M.,Ohnishi,T.,Kaise,H.,Koide,H.,Ogita,K.,and Fukami,Y.: "Characterization of protein kinase C in Xenopus oocytes." Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 105-114 (1992)

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  • [文献書誌] Ogita,K.,Miyamoto,S.,Yamaguchi,K.,Koide,H.,Fujisawa,N.,Kikkawa,U.,Sahara,S.,Fukami,Y.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of δ-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

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  • [文献書誌] Koide,H.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of ε-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogita,K.,Koide,H.,Kikkawa,U.,Kishimoto,A.,and Nishizuka,Y.: "Advances in Second Messenger and Phosphoprotein Research" Raven Press(New York), 750 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nishizuka,Y.,Shearman,M.S.,Oda,T.,Shinomura,T.,Berry,N.,Asaoka,Y.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,Kishimoto,A.,Kose,A.,Saito,N.,and Tanaka,C.: "Progress in Brain Research" Elsevier(Amsterdam), 292 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogita,K.,Ono,Y.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 763 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kishimoto,A.,Saito,N.,and Ogita,K.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 763 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fukami,Y.and Nishizuka,Y.: "Adenine Nucleotides in Cellular Energy Transfer and Signal Transduction." Birkhauser Verlag(Basel), (1992)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ito, A., Saito, N., Hirata, M., Kose, A., Tsujino, T., Yoshihara, C., Ogita, K. Kishimoto, A., Nishizuka, Y., and Tanaka, C.: "Immunocytochemical localization of the alpha subspecies of protein kinase C in rat brain." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87. 3195-3199 (1990)

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  • [文献書誌] Ogita, K., Miyamoto, S., Koide, H., Iwai, T., Oka, M., Ando, K., Kishimoto, A., Ikeda, K., Fukami, Y., and Nishizuka, Y.: "Protein kinase C in Saccharomyces cerevisiae, comparison with the mammalian enzyme." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 87. 5011-5015 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Bignon, E., Ogita, K., Kishimoto, A., and Nishizuka, Y.: "Protein kinase C subspecies in estrogen receptor-positive and -negative human breast cancer cell lines." Biochem. Biophys. Res. Commun.171. 1071-1078 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sato, K. -I., Miki, S., Tachibana, H., Hayashi, F., Akiyama, T., and Fukami, Y.: "A synthetic peptide corresponding to residues 137 to 157 of p60^<v-src> inhibits tyrosine-specific protein kinases." Biochem. Biophys. Res. Commun.171. 1152-1159 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tachibana, H., Sasaki, Y., Sawano, H., and Kitakawa, M.: "An 'Initiatior-terminator' vector suitable for direct expression of genetic segments in Escherichia coli." Protein Engineering. 3. 371 (1990)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nishizuka, Y., Shearman, M. S., Oda, T., Shinomura, T., Berry, N., Asaoka, Y., Ogita, K., Kikkawa, U., Kishimoto, A., Kose, A., Saito, N., and Tanaka, C.: "Protein kinase C family and nervous function." Progress Brain Res.89. 125-141 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogita, K., Ono, Y., Kikkawa, U., and Nishizuka, Y.: "Expression, separation, and assay of protein kinase C subspecies." Methods Enzymol.200. 228-234 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kishimoto, A., Saito, N., and Ogita, K.: "Preparation and use of protein kinase C subspecies-specific anti-peptide antibody." Methods Enzymol.200. 447-454 (1991)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sahara, S., Sato, K. -I., Aoto, M., Ohnishi, T., Kaise, H., Koide, H., Ogita, K., and Fukami, Y.: "Characterization of protein kinase C in Xenopus oocytes." Biochem. Biophys. Res. Commun.182. 105-114 (1992)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogita, K., Miyamoto, S., yamaguchi, K., Koide, H., Fujisawa, N., Kikkawa, U., Sahara, S., Fukami, Y., and Nishizuka, Y.: "Isolation and characterization of delta-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1992)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Koide, H., Ogita, K., Kikkawa, U., and Nishizuka, Y.: "Isolation and characterization of epsilon-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (1992)

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sahara,S.,Sato,K.I.,Aoto,M.,Ohnishi,T.,Kaise,H.,Koide,H.,Ogita,K.,and Fukami,Y.: "Characterization of protein kinase C in Xenopus oocytes." Biochem.Biophys.Res.Commun.182. 105-114 (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Ogita,K.,Miyamoto,S.,Yamaguchi,K.,Koide,H.,Fujisawa,N.,Kikkawa,U.,Sahara,S.,Fukami,Y.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of δ-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Koide,H.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Isolation and characterization of ε-subspecies of protein kinase C from rat brain." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Nishizuka,Y.,Shearman,M.S.,Oda,T.,Shinomura,T.,Berry,N.,Asaoka,Y.,Ogita,K.,Kikkawa,U.,Kishimoto,A.,Kose,A.,Saito,N.,and Tanaka,C.: "Progress in Brain Research" Elsevier(Amsterdam), 7 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Ogita,K.,Ono,Y.,Kikkawa,U.,and Nishizuka,Y.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 7 (1991)

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      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Kishimoto,A.,Saito,N.,and Ogita,K.: "Methods in Enzymology" Academic Press(San Diego), 8 (1991)

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      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Fukami,Y.and Nishizuka,Y.: "Adenine Nucleotides in Cellular Energy Transfer and Signal Transduction" Birkhauser Verlag(Basel), (1992)

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      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Ogita,K.,Miyamoto,S.,Koide,H.,Iwai,T.,Oka,M.,Ando,K.,Kishimoto,A.,Ikeda,K.,Fukami,Y.,and Nishizuka,Y.: "Protein kinase C in Saccharomyces cerevisiae:Comparison with the mammalian enzyme" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 87. 5011-5015 (1990)

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      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Sato,K.,Miki,S.,Tachibana,H.,Hayashi,F.,Akiyama,T.,and Fukami,Y.: "A synthetic peptide corresponding to residues 137 to 157 of p60^<vーsrc> inhibits tyrosineーspecific protein kinases" Biochem.Biophys.Res.Commun.171. 1152-1159 (1990)

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      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Ogita,K.,Koide,H.,Kikkawa,U.,Kishimoto,A.,and Nishizuka,Y.: "The heterogeneity of protein kinase C in signal transduction cascade" Adv.Second Messenger Phosphoprotein Res.24. 218-223 (1990)

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      1990 実績報告書
  • [文献書誌] Ogita,K.,Kikkawa,U.,Ono,Y.,and Nishizuka,Y.: "The expression,separation and assay of protein kinase C subspecies" Methods Enzymol.(1991)

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      1990 実績報告書

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公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

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