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細菌が生産するペプスタチン非感受性カルボキシルプロテア-ゼ構造と機能

研究課題

研究課題/領域番号 02660124
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 応用微生物学・発酵学
研究機関大阪府立大学

研究代表者

小田 耕平  大阪府立大学, 農学部, 助教授 (50081584)

研究期間 (年度) 1990 – 1991
研究課題ステータス 完了 (1991年度)
配分額 *注記
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1991年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1990年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
キーワード酸性プロテア-ゼ / カルボキシルプロテア-ゼ / アスパルティックプロテア-ゼ / ペプスタチン非感受性 / SーPI非感受性 / Scytalidiumタイプ / ペプシンタイプ / 構造と機能
研究概要

カルボキシルプロテア-ゼ(CP)は、ペプスタチン感受性CP(ペプシンなどの既報のCP)とペプスタチン非感受性CPの2群に大別される。前者のCPは酵素学的性質が良く類似し、一次構造、高次構造も相同性が高い。後者のCPは、著者らが発見したものであり、前者に比べ、基質特異性や一次構造も、かなり異なる。従って、このCP群は前者のCPとは別の系統を辿って進化したものと予想される。このような特徴をもつペプスタチン非感受性CPの構造と機能を解明する研究の一環としてPseudomonas sp.No.101CPに的を絞り、検討を加えた。尚、このCPは、原核生物より得られた最初のCPであり、化学的に決定された一次構造は既報のいずれのCPとも相同構造がなく、CPの触媒残基アミノ酸配列であるD^*TG(D^*:触媒残基)配列もない極めてユニ-クなcpである。
1.触媒残基の同定 この目的の為に、著者らの分取したチロスタチン(IsovalerylーTyrーLeaーTyrosinal,Ki=2.5nM)の阻害部位、Tyrosinal側に触媒残基のカルボキシル基と共有結合できるようにエポキシ環を付け、そのペプチド骨格の長さを変えた3種類の阻害剤を合成し、その効果を調べた。その結果、ペプチド骨格の最も短いZーTyrーOーCH_2ーEpoxideのみが阻害活性を示し、この阻害は拮抗型であることが判明した。
2.遺伝子の解析 このCP遺伝子の金塩基配列を決定した。成熟型CPのアミノ酸配列(372残基)は先に化学的に決定したものと一致した。また,このCPは587アミノ酸残基のプレプロ体として生成され、これがプロセッシングを受けて、372アミノ酸残基の成熟型CPとして分泌されることが明らかになった。更に、このプレプロ部分は、成熟型CPの活性化に必須であることが強く示唆された.
以上により、このCPの構造と機能解析の準備がほぼ完了した。

報告書

(3件)
  • 1991 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (32件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (32件)

  • [文献書誌] K.Oda,Y.Fukada,S.Murao K.Uchida and M.Kainosho: "A Novel Proteinase Inhibitor,Inhibiting Some Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinases" Agric.Biol.Chem.53. 405-415 (1989)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.Tsuru,A.Naotuka,R.Kobayashi,T.Yoshimoto,K.Oda and S.Murao: "Inactivation of Scytalidium lignicolum Acid Proteinase B with 1,2-epoxy-3-(4'-azido-2'-nitrophenoxy)propane" Agric.Biol.Chem.53. 2751-2756 (1989)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda,H.Nakatani and B.M.Dunn: "Substrate Specificity,and Kinetic Properties of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp.No.101" Biochim.Biophys.Acta.(1992)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase" J.Biochem.(Tokyo).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "cloning and Sequencing of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "The Role of Prepro Region of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Y.Yoshinaka,Y.Kato and K.Oda: "Retroviral Protease Maturation and Morphogenesis(ed.by L.H.Pearl) "Retrovira Protease:Substrate Specificity and Inhibitors"" Stockton Press,N.Y., 9 (1990)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda and S.Murao: "The Aspartic Proteinases:Genetic,Structures and Mechanisms (ed.by B.M.Dunn) "Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinases"" Plenum Publishing Corporation,N.Y., 7 (1992)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Oda, Y. Fukuda, S. Murao, K. Uchida and M. Kainosho: "A Novel Proteinase Inhibitor, Tyrostatin, Inhibiting Some Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinases" Agric. Biol. Chem.53. 405-415 (1989)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D. Tsuru, A. Naotuka, R. Kobayashi, T. Yoshimoto, K. Oda and S. Murao: "Inactivation of Scytalidium lignicolum Acid Protease B with 1, 2-Epoxy-3-(4'-azido-2'-nitrophenoxy)propane" Agric. Biol. Chem.53. 2751-2756 (1989)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Oda H. Nakatani and B. M. Dunn: "Substrate Specificity, and Kinetic Properties of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp. No. 101" Biochem. Biophys. Acta. (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Oda et al: "Complete Amino Acid Sequence of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp. No. 101" J. Biochem.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Oda et al: "Cloning and Sequencing of Pepstatin-insensitve Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp. No. 101" J. Biochem.

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      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] "The Role of Prepro Region of Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp. No. 101" J. Biochem.

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    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Y. Yoshinaka, Y. Kato and K. Oda: "Retroviral Proteases Maturation and Morphogenesis" "Retroviral Protease : Substrate Specificity and Inhibitors". Stockton Press, N. Y.(1990)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Oda and S. Murao: "The aspartic Proteinases : Genetic, Structures and Mechanisms" "Pepstatin-insensitive Carboxyl Proteinases". Plenum Publishing Corporation, N. Y.(1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Oda,Y.Fukuda,S.Murao,K.Uchida and M.Kainosho: "A Novel Proteinase Inhibitor,Inhibiting Some Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinases" Agric.Biol.Chem.53. 405-415 (1989)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] D.Tsuru,A.Naotuka,R.Kobayashi,T.Yoshimoto,K.Oda and S.Murao: "Inaction of Scytalidium lignicolum Acid Proteinase B with 1,2ーepoxyー3ー(4'ーazidoー2'ーnitophenoxy)propane" Aqric.Biol.Chem.53. 2751-2756 (1989)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda,H.Nakatani and B.M.Dunn: "Subsrate Specificity,and Kinetic Properties of Pepstatininsensitive Carboxyl Proteinase from Pseudomonas sp.No.101" Biochim.Biophys.Acta.(1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "Complete Amino Acid Sequence of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase" J.Biochm.(Tokyo).

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "Cloning and Sequencing of Pepstainーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas sp.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "The Role of Prepro Region of Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase Gene from Pseudomonas ap.No.101" J.Biochem.(Tokyo).

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Yoshinaka,Y.Kato and K.Oda: "Retroviral Protease Maturation and Morphogenesis(ed.by L.H.Pearl)“Retrovira Protease:Substrate Specifictty and Inhibitors"" Stockton Press,N.Y., 9 (1990)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda and S.Murao: "The Aspartic Proteinases:Genetic,Structures and Mechanisms(ed.by B.M.Dunn)“Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinases"" Plenum Publishing Corporation,N.Y., 7 (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] S.Murao and K.Oda: "Structure and Properties of Non Pepstatinーsensitive Carboxyl Proteinases" Proceedings of the 18th LinderstrmーLang Conference ″Aspartic Proteinases″. 39-39 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] 村尾 沢夫,小田 耕平: "放線菌由来のメタルプロテア-ゼインヒビタ-" 蛋白質・核酸・酵素. 34. 980-988 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda,他4名: "A Novel Proteinase Inhibitor,Inhibiting Some Pepstatinー Insensitive Carboxyl Proteinaes" Agric.Biol.Chem.53. 405-415 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] D.Tsuru 他5名: "Inactivation of Scytalidium lignicolum Acid Proteinase B with 1,2ーEpoxyー3ー(4′ーazidoー2′ーnitrophenoxy)propane" Agric.Biol.Chem.53. 2751-2756 (1989)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "Complete amino Acid Sequence of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase" J. Biochem.(Tokyo).

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda et al.: "Cloning and Sequencing of Pseudomonas sp.No.101 Pepstatinーinsensitive Carboxyl Proteinase" Agric.Biol.Chem.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] K.Morihara and K.Oda(ed.by G.Winkelmann): "Microbial Degradation of Natural Products (Microbial degradation of proteins" V.C.H.(F.R.G.), (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書
  • [文献書誌] K.Oda and S.Murao(ed.by B.M.Dunn): "Aspartic Proteinasea (Pepstatinーinsensitive carboxyl Proteinases" Prenum Publishing Corp.,New York., (1991)

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書

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公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

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