| 研究概要 |
1)ラット脳のcDNAライブラリ-から2種類の膜結合型グアニル酸シクラ-ゼをクロ-ニングした。 DNA配列解析の結果、それぞれGCーA,GCーBと同一であり、すべてのコ-ディング領域を含むクロ-ンであった。 GCーBには、細胞内チナ-ゼドメインのごく一部が欠如した変異受容体をコ-ドするクロ-ンが含まれていた。
2)これらを発現ベクタ-に組み込み、COS7細胞にトランスフェクトして、受容体タンパク質を発現させた。
3)発現させたGCーA及び2種のGCーBと、ラットANP,BNP,CNPとの相互作用を検討した。 ^<125>I標識したラットANP,BNP,CNPを用いて発現受容体との親和性を検討した結果、GCーAは ANPとBNPに対し親和性が高く、CNPに対しては低い事が明らかとなった。 一方GCーBは、CNPに対し親和性が高く、ANP,BNPとは結合しなかった。 これと同様にcGMPの産生で見ても、GCーAは、ANP,BNPによりcGMP産生が刺激されるが CNPでは刺激されない。 一方、GCーBは、CNPによってcGMP産生が刺激されるが、ANP,BNPでは刺激されない。 これらの結果からGCーAは、ANPおよびBNPに対する特異的受容体であり,GCーBは、CNPに対する特異的受容体であることが、はじめて判明した。本研究の目的は充分に達成されたものと考える。
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