| 研究課題/領域番号 |
02670180
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
細菌学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
西渕 光昭 京都大学, 医学部, 助教授 (50189304)
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| 研究分担者 |
竹田 美文 京都大学, 医学部, 教授 (30029772)
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| 研究期間 (年度) |
1990
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| 研究課題ステータス |
完了 (1990年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1990年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | 腸炎ビブリオ / 病原性ビブリオ / 溶血毒 / ヘモリシン / 毒素遺伝子 / 腸管感染症 |
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| 研究概要 |
腸炎ビブリオおよび類似ビブリオの産生する耐熱性溶血毒(TDH)の病原的役割を明らかにする為に、以下のような順序で研究を進め、それぞれに示したような成果を得た。1.腸炎ビブリオはTDHのみならず、類似する溶血毒(TDHーrelated hemolysin,TRH)も同時に産生する可能性があるので、TRHを特異的に検出するDNAプロ-ブを用いて、TRHを産生する能力のある菌株とない菌株を区別した。2.患者から分離された神奈川現象陽性分離菌株は、TDHをコ-ドする遺伝子を2コピ-持つ(tdh1およびtdh2)。その代表菌株として、TRH産生能力のないAQ3815株を選出した。3.AQ3815株のtdh1遺伝子をin vivo recombination法によって変異遺伝子置換して、不活化したところ、殆ど溶血活性の低下が認められなかった。従ってtdh1遺伝子は殆ど発現されず、むしろtdh2遺伝子が菌の溶血活性を担っていると考えられた。4.AQ3815株のtdh2遺伝子のみをsuicide vectorを利用して不活化したところ、溶血活性は殆ど無くなったが、感度の高いELISA法でTDHの産生を測定したところ、残存するtdh1遺伝子の発現によって、野生型菌の産生するTDHの約5%に相当するTDHが産生されていることが明らかになった。5.AQ3815株の2コピ-のtdh遺伝子の両者の不活化し、TDHをまったく産生しないisogenic mutantを作製した。この変異株と野生型AQ3815の培養上清を、ウサギの腸管粘膜上皮をUssing Chamberにマウントた実験系で比較した。その結果、培養上清中のTDHは粘膜上皮のイオンの透過性を変化させており、腸管内の分泌作用に影響を及ぼしている可能性が示唆された。
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