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ダイオキシンの免疫化学的測定法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 02670233
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 衛生学
研究機関大阪府立公衆衛生研究所

研究代表者

高垣 裕  大阪府立公衆衛生研究所, 公衆衛生部, 総括研究員 (20075055)

研究期間 (年度) 1990
研究課題ステータス 完了 (1990年度)
配分額 *注記
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1990年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワードダイオキシン関連物質 / モノクロナ-ル抗体 / 酵素免疫測定法
研究概要

1.抗原の作製:2,4ーDichlorophenoxy acetic acid(2,4ーD)の活性エステルをN,N'ーDicyclohexylcarbodiimide及びNーHydroxysuccinimideを使用して合成した。これを用いて2,4ーDーhIgG及び2,4ーDーBSAを作製した。
2.免疫及び細胞融合:6週令のマウス(♀,A/J)にComplete Freund's Adjuvantと共に2,4ーDーhIgGを腹腔内に投与した。5週間後に抗原のみで再度免疫し、3日後に免疫した脾細胞を取り出しX63ーAg8ー6.5.3.細胞とポリエチレングリコ-ル(MW=1,500)を用いて細胞融合を行なった。
3.抗体のスクリ-ニング及びクロ-ニング:抗体の測定はポリスチレン製96ーwellーplatesに2,4DーBSAをコ-トした物を用いて測定した。また限界希釈法を用いてクロ-ニングを行なった結果、14クロ-ンのモノクロナ-ル抗体産生細胞が得られた。
4.ハプテンにより抗原抗体結合反応が抑制されるクロ-ンの選択:Inhibitorとして2,4ーDichlorophenolを使用して、得られた各クロ-ンの培養上清について調べた。その結果4つのクロ-ン、138ー1、302、839、848でハプテンにより抗原抗体結合反応が抑制される事が明らかになった。
5.抗体の特異性の検討:Dichlorophenolの異性体、2,3ー,2,4ー,2,5ー,2,6ー,3,4ー,3,5ーDichlorophenol(6種類)を用い、クロ-ン138ー1(IgG_1,κ)について調べた結果、2,4ー及び3,4ーDichlorophenolに対して特異性が非常に高く、2,3ー及び3,5ーDichlorophenolはほとんど、また2,5ー及び2,6ーDichlorophenolは全く結合しない事が明らかになった。この抗体を用いてサンドイッチassayの検討を現在行なっている。
以上の事から今回得られた抗2,4ーDichlorophenylモノクロナ-ル抗体はダイオキシンなどの環境汚染物質をサンドイッチassay法で測定できる可能性が示された。

報告書

(1件)
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (1件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (1件)

  • [文献書誌] Yutaka Takagaki: "The sandwich assay of dioxin related compounds using monoclonal antibodies against 2,4ーdichlorophenyl group." Journal of the Association of Official Analytical Chemists.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書

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公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

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