PIVKAーIX,PIVKAーXに対するモノクロ-ナル抗体の作製と,肝細胞癌におけるPIVKAの産生機序

• 研究課題/領域番号: 02670325
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 東京女子医科大学
• 研究代表者: 奥田 博明 東京女子医科大学, 医学部, 講師 (60119922)
• 研究分担者: 小幡 裕 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (20075237) ; 飯塚 文瑛 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (70120087)
• 研究期間 (年度): 1990 – 1991
• 研究課題ステータス: 完了 (1991年度)
• 配分額: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円); 1991年度: 900千円 (直接経費: 900千円); 1990年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
• キーワード: 肝癌 / PIVKAーII / PIVKAーIX / PIVKAーX / 肝癌培養細胞 / モノクロ-ナル抗体 / ビタミンK / γーglutamyl carboxylase / vit.K / γーcarboxylase / γーカルボキシレ-ションシステム / プロトロビン

研究概要

1.PIVKAーIXおよびPIVKAーXに対するモノクロ-ナル抗体の作製
現在用いられているPIVKAーIIに対するモノクロ-ナル抗体は,抗原となるPIVKAーIIのカルボシキル化の程度によって反応性に違いがみられる.より詳細なPIVKAーIIの研究には全てのPIVKAーIIと反応するモノクロ-ナル抗体が必要である.この点を考慮して,当初はPIVKAーIX,Xに対するモノクロ-ナル抗体の作製の方針であったが,全てのPIVKAーIIに対するモノクロ-ナル抗体とPIVKAーIXに対するモノクロ-ナル抗体の作製に変更した.NativeなPIVKAーII,PIVKAーIXの精製に備え肝癌培養細胞株huHー2の培養上清を保存した.抗FーII,FーIXのモノクロ-ナル抗体の作製は,腹腔内投与で免疫したマウスの脾細胞を取りポリエチレングリコ-ルによりミエロ-マ細胞と融合させ抗体産生クロ-ンを得る方法に依った.クロ-ンの検索はFーII,FーIXをcoatingしたアッセイプレ-トによるELISA法を用いた.FーIIでは16種類,FーIXでは24種類の抗体産生株を確立した.これらの細胞をマウスの腹腔内に接種し,腹水を精製して,まずFーIXに対するAffinityカラムを作製した.これを利用して保存上清からPIVKAーIXを精製してモノクロ-ナル抗体を作製する予定である.PIVKAーIIについてはカラムを作製中である.
2.PIVKAの産生機序
肝癌組織より超遠心法でマイクロソ-ムをとり可溶化し,γーglutamyl carboxylase活性を測定した.肝癌でも同酵素の欠損はなく,前駆体の過剰産生を示唆する高活性が示された.肝癌組織のvit.KをHPLC法で測定したところ,vit.Kの大量負荷時には肝癌のvit.Kの取り込みが低下することが示された.またヌ-ドマウスに肝癌培養細胞を移値した新たな実験モデルを作製した.このモデルは肝癌のvit.K感受性等の検討に有用であった.

研究成果

• [文献書誌] Toshio Fukusato: "Desーγーcarboxy prothrombin in tissues of hepatocellular carcinoma:Immunohistochemical and immunoelectron microscopical studies." Hepatology. 12. 404 (1990)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Abnormal prothrombin (PIVKA-II) and hepatocellular carcinoma." Trop Gastroenterol. 12. 59-66 (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Vitamin K dependent proteins and hepatocellular caricinoma." J Gastroenterol Hepatol. 6. 392-399 (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Sensitivity of desーγーcarboxy prothrombin to vitamin K in hepatocellular carcinoma." Hepatology. 14. 106A (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Midori Furukawa: "Changes of plasma desーγーcarboxy prothrombin levels in response to vitamin K in patients with hepatocellular carcinoma." Cancer. 69. 31-38 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] 山縣 英晴: "ヌ-ドマウスを利用したPIVKAーIIの薬剤感受性の検討" 肝臓.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Toshio Fukusato et al: "Des-gamma-carboxy prothrombin in tissues of hepatocellular carcinoma : Immunohistochemical and immunoelectron microscopical studies." Hepatology. 12(2). 404 (1990)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda et al: "Abnormal prothrombin (PIVKA-II) and hepatocellular carcinoma" Trop Gastroenterol. 12(2). 59-66 (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda et al: "Vitamin K dependent proteins and hepatocellular carcinoma" J Gastroenterol Hepatol. 6(4). 392-399 (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hiroaki Okuda et al: "Sensitivity of des-gamma-carboxy prothrombin to vitamin K in hepatocellular carcinoma" Hepatology. 14(4). 106 A (1991)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Midori Furukawa et al.: "Changes of plasma des-gamma-carboxy prothrombin prothrombin levels in response to vitamin K in patients with hepatocellular carcinoma" Cancer. 69(1). 31-38 (1992)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hideharu Yamagata et al: "Studies on drug sensitivity of PIVKA-II in a nude mouse model" Acta Hepatol Jpn.
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Toshio Fukusato: "Desーy carboxy prothrombin in tissues of hepatocellular carcinoma:Immunohistochemical and immunoelectron microscopical studies." Hepatolgy. 12. 404 (1990)
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Abnormal prothrombin(PIVKAーII)and hepatocellular carcinoma." Trop Gastroenterol. 12. 59-66 (1991)
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Vitamin K dependent proteins and hepatocellular carcinoma." J Gastroenterol Hepatol. 6. 392-399 (1991)
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Sensitivity of desーγーcarboxy prothrombin to vitamin K in hepatocellular carcinoma." Hepatology. 14. 106A (1991)
• [文献書誌] Midori Furukawa: "Changes of plasma desーγーcarboxy prothrombin levels in response to vitamin K in patients with hepatocellular carcinoma." Cancer. 69. 31-38 (1992)
• [文献書誌] 山縣 英晴: "ヌ-ドマウスを利用したPIVKAーIIの薬剤感受性の検討" 肝臓.
• [文献書誌] Hiroaki Okuda: "Production of abnormal vitamin Kーdependent proteins by hepatocellular carcinoma." Hepatology. 10. 673 (1989)
• [文献書誌] 奥田 博明: "肝細胞癌における異常プロトロンビン(PIVKAーII)の臨床的意義と基礎的知見" 東京女子医科大学雑誌. 60. 978-979 (1990)
• [文献書誌] 奥田 博明: "肝細胞癌の腫瘍マ-カ-としてのPIVKAs" 衛生検査. 38. 1654-1660 (1989)
• [文献書誌] 古川 みどり: "肝細胞癌における各種PIVKAの産生に関する検討" 肝臓. 31. 110 (1990)
• [文献書誌] 福里 利夫: "異常プロトロンビン(PIVKAーII)の肝癌細胞内局在の臨床的及び病理学的意義" 肝臓. 31. 714 (1990)
• [文献書誌] Midori Furukawa: "Changes of plasma desーγーcarboxy prothrombin levels in response to vitamin K in patients with hepatocellular carcinoma." Cancer.