| 研究概要 |
ヒト膀胱癌由来培養細胞株KKー47細胞よりHAT selectoonにて得られた細胞株は細胞感染が認められ,野性型細胞を用いて本研究を逐行した。光感受性物質はHpDI(Queen Elizabeths Hospital,Australia)を,培養液はEagle MEM(日水製薬)に10%中胎児血清(Microbological Association,USA)を加えたものを,照射光源はアルゴン色素レ-ザ-光(ADL,630nm,SpectraーPhysics)およびUV(UVA;300ー430nm,UVB;280ー320nm,東芝医療用機器株式会社,MーDMRー1)を用いた。HpDI処理はすべて暗室にて行った.HpDIは処理3時間で細胞毒性が認められない40μg/mlを用い,HpDI処理後ADL,lmW/cm^2,2分間照射(0.12J/cm^2)での細胞生残率は22%であり,以下この条件を用いた。UVA照射(5mW/cm^2)では6J/cm^2の照射量にて,UVB照射10.1mW/cm^2)では0.6mJ/cm^2にてそれぞれ約20%の細胞生残率であり,以下この照射量を用いた。突然変異細胞の選択薬として6ーthroguanine(6ーTG,Sigma)を用いた。10^6個/シャ-レの細胞にHpDIを接触させ,ADL照射した群,UVAまたはUVBのみを照射した群に分け,10^6個/シャ-レに分注し培養を続けた。この継代培養開始時を突然発現時間の0日目とした。継代培養0,2,4,6,8,9日目に細胞を取り出し,10^5個/シャ-レに分注し,5μg/mlとなるよう6ーTGを加え14日間培養した。同時にコロニ-形成法にて細胞生残率を求めた。UVB照射群における突然変異発現は4日目より増加し,6日目より9日目までほぼ一定であった。HpDI+ADL照射群およびUVA単独照射群の突然変異発現は9日目まで10^5個生細胞当たり8.0±52個とほぼ一定であり,無処理の対照群と変化なかった。HpDIを用いた光力学的作用には明らかなmutagenie activityは認められなかった。臨床的には,40例の難治性膀胱癌に対して光力学的治療を施行したがmutationを示唆する所見は認められなかった。
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