• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

Expression vectorの眼内への移入実験

研究課題

研究課題/領域番号 02670796
研究種目

一般研究(C)

配分区分補助金
研究分野 眼科学
研究機関順天堂大学

研究代表者

堀田 善裕 (堀田 喜裕)  順天堂大学, 医学部・眼科, 助手 (90173608)

研究分担者 秋山 修一  順天堂大学, 医学部・眼科, 助手 (10192915)
横山 利幸  順天堂大学, 医学部・眼科, 助手 (00191528)
藤井 慶子  順天堂大学, 医学部・眼科, 講師
藤木 慶子  順天堂大学, 医学部眼科, 講師
研究期間 (年度) 1990 – 1991
研究課題ステータス 完了 (1991年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1991年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1990年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
キーワードベクタ- / 遺伝子移入 / 遺伝子発現 / 遺伝子治療 / 硝子体 / 分子生物学 / RNA
研究概要

1.培養細胞への遺伝子の移入実験
ベクタ-はpcDを用いた。pcDにヒトOATのcDNAを組み込んだpcDHOATを、OAT活性の非常に低いChinese hamster ovary(CHO)細胞に、電気穿孔法によって移入した。移入してから48時間後にすべて回収して、それぞれサザンブロット、ノ-ザンブロット、ウエスタンブロットを行ない、さらにOATの活性を測定した。移入したCHO細胞には、ベクタ-DNAが存在し、ヒトOATのmRNAと蛋白質が産生され、OAT活性が著明に上昇した。さらにOATのmRNAがほとんど欠損し、そのためにOATの活性の非常に低い脳回状網膜脈絡膜萎縮患者の線維芽細胞(GA35細胞)を用いて、上記のCHO細胞の実験と同様に行なった。GA35細胞はCHO細胞と異なって株化されていないためか、電気穿孔後多くの細胞が培養液に浮遊した。移入したGA35細胞には、ベクタ-DNAが存在し、ヒトOATのmRNAが産生された。しかしOATの活性のある蛋白質は認められたがわずかであった。CHO細胞に活性のあるヒトのOAT蛋白質を作らせることに成功し、GA35細胞にも活性のあるOAT蛋白質を作らせることにいちおうは成功したが、ごくわずかであり今後に課題を残した。
2.家兎硝子体への遺伝子の移入実験
眼組織へ目的の遺伝子を移入し発現させる目的で、家兎の硝子体にpcDHOATを蒸留水に溶かした液を、毛様体扁平部から27ゲ-ジ針で刺入して硝子体の中央に注入した。3カ月後に屠殺し、各組織からRNAを抽出し、ノ-ザンブロットを行なった。残念ながら今のところ家兎の網膜にヒトのOATのmRNAを発現させることに成功していない。今後使用するベクタ-、DNAの注入方法などに工夫が必要と考える。また本研究期間中に、網膜色素変性やレ-ベル病などの眼科領域で治療の対照と考えられる疾患の研究が進んだため、日本人家系について分子レベルで検討を加えた。

報告書

(3件)
  • 1991 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1990 実績報告書
  • 研究成果

    (27件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (27件)

  • [文献書誌] 早川 むつ子,藤木 慶子,田辺 歌子他: "原発性定型網膜色素変性症の遺伝的異質性と臨床像に関する検討" 臨床眼科. 44. 1096-1097 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,藤木 慶子,早川 むつ子他: "Polymerase Chain Reaction(PCR)法によるLeber病の早期診断の試み" 臨床眼科. 44. 1237-1240 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 荒 文乃,堀田 喜裕,早川 むつ子他: "レ-ベル病の遺伝子診断の試み" 日本眼科学会雑誌. 95. 715-720 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,玉城 宏一,藤木 慶子他: "網膜芽細胞腫の一家系の分子生物学的検討" 臨床眼科医報. 85. 194-197 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujiki K,Hotta Y,Hayakawa M,et al: "A mutation of mitochondrial DNA in Japanese Families with Leber's hereditary optic neuropathy" Japanese Journal of Human Genetics. 36. 143-147 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,横山 利幸,小林 千博他: "結核菌と単純ヘルペスウィルスの二重感染によると思われる牽引性網膜剥離を合併した両眼内炎の一例" 臨床眼科医報. 85. 2884-2889 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayakawa M, Fujiki K, Tanabe U, et al.: "Genetic analysis of heterogeneity and clinical manifestation in primary typical retinitis pigmentosa" Jpn J Clin Ophthalmol. 44. 1096-1097 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hotta Y, Fujiki K, Hayakawa M, et al.: "Early diagnosis of Leber's optic neuropathy by polymerase chain reaction" Jpn J Clin Ophthalmol. 44. 1237-1240 (1990)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ara F, Hotta Y, Hayakawa M, et al.: "A trial of molecular diagnosis in Leber's optic neuropathy" Acta Soc Ophthalmol Jpn. 95. 715-720 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hotta Y, Tamaki K, Fujiki K, et al.: "Molecular biological features in a pedigree with retinoblastoma" Jpn Rev Clin Ophthalmol. 85. 194-197 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujiki K, Hotta Y, Hayakawa M, et al.: "A mutation of mitochondrial DNA in Japanese families with Leber's hereditary optic neuropathy" Jpn J Hum Genet. 36. 143-147 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hotta Y, Yokoyama T, Kobayashi C, et al.: "A case of bilateral fractional retinal detachment and endophthalmitis due to herpes simplex and tuberculous infection" Jpn Rev Clin Ophthalmol. 85. 2884-2889 (1991)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hotta Y, Shiono T, Hayakawa M, et al.: "Molecular biological study of the rhodopsin gene in Japanese patients with autosomal dominant retinitis pigmentosa" Acta Soc Ophthalmol Jpn. 96. 237-242 (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hotta Y, Inana G: "Expression of human ornithine aminotransferase (OAT) in OAT-deficient Chinese hamster ovary cells and fibroblasts of gyrate atrophy patient" Jpn J Ophthalmol. (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Shiono T, Hotta Y, Noro M, et al.: "Clinical features of a Japanese family with autosomal dominant retinitis pigmentosa caused by a point mutation in codon 347 of the rhodopsin gene" Jpn J Ophthalmol. (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura M, Ara F, Yamada M, et al.: "A high frequency of mitochondrial ND4 gene mutation in Japanese pedigrees with Leber hereditary optic neuropathy" Jpn J Ophthalmol. (1992)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1991 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 早川 むつ子,藤木 慶子,田辺 歌子,他: "原発性定型網膜色素変性の遺伝的異質性と臨床像に関する検討" 臨床眼科. 44. 1096-1097 (1990)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,藤木 慶子,早川 むつ子,他: "Polymerase Chain Reaction(RCR)法によりLeber病の早期診断の試み" 臨床眼科. 44. 1237-1240 (1990)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] 荒 文乃,堀田 喜裕,早川 むつ子,他: "レ-ベル病の遺伝子診断の試み" 日本眼科学会雑誌. 95. 715-720 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,玉城 宏一,藤木 慶子,他: "網膜芽細胞膜の一家系の分子生物学的検討" 臨床眼科医報. 85. 194-197 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Fujiki K,Hotta Y,Hayakawa M,et al.: "A mutation of mitochndrial DNA in Japanese families with Leber's hereditary optic neuropathy" Japanese Journal of Human Genetics. 36. 143-147 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,横山 利幸,小林 千博,他: "結核菌と単純ヘルペスウィルスの二重感染によると思われる専引性網膜剥離を合併した両眼内炎の一例" 臨床眼科医報. 85. 2884-2889 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] 堀田 喜裕,塩野 貴,早川 むつ子,他: "日本人の常染色体優性網膜色素変性患者ロトプン遺伝子の分子生物学的検討" 日本眼科学会雑誌. 96. 237-242 (1991)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Hotta Y,Inana G: "Expression of human ornithine aminotransferase(OAT) in OATーdeficient Chinese hamster ovary cells and fibroblasts of gyrate atrophy prtient" Japanese Journal of Ophthalomlogy. 36. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Shino T,Hotta Y,Noro M,et al.: "Clinical features of a Japanese family with autosomal dominant retinitis pigmentosa caused by a point mutation in codon 347 of the rhodopsin gene" Japanese Journal of Ophthalmology. 36. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Nakamura M,Ara F,Yamada M,et al.: "A high frequenoy of mitochondrial ND4 gene mutation in Japanese pedigrees with Leber hereditary optic neuropathy" Japanese Journal of Ophthalmology. 36. (1992)

    • 関連する報告書
      1991 実績報告書
  • [文献書誌] Yoshihiro Hotta and George Inana: "Gene transfer and expression of ornithine aminotransferase" Proceedings of the XXVI International Congress of Ophthalmology.

    • 関連する報告書
      1990 実績報告書

URL: 

公開日: 1990-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi