| 研究課題/領域番号 |
02670832
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
機能系基礎歯科学
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
児玉 孝雄 岡山大学, 歯学部, 助教授 (30034200)
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| 研究分担者 |
太田 寛行 岡山大学, 歯学部, 助手 (80168947)
福井 一博 岡山大学, 歯学部, 助教授 (70034171)
嶋本 達家 岡山大学, 歯学部・付属病院, 講師 (30170963)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1991
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| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1991年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1990年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | Streptococcus Mutans / ATP / エネルギー代謝 / Streptococcus mutans / エネルギ-代謝 |
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| 研究概要 |
Streptococcus Mutans FA-1株を低pH環境下で培養すると、細胞維持エネルギーのコストが顕著に増加することが明らかとなった(前年度)。この維持エネルギーは細胞の恒常性を保つために費やされるエネルギーであるとすると、酸性条件下で細胞内pHを中性に保つために多くのエネルギーが消費されていると考えられる。そこで、細胞内pH調節に重要な役割を演じているプロトンATPase活性を中性(pH7.0)増殖細胞、酸性(pH5.0)増殖細胞について比較検討した。
ATPase活性の測定には、超高圧細胞破砕法で調製した膜画分を用い、遊離リン酸の定量には、Kodamaらの微量測定法を使用して、ATPase活性測定法をまず確立した。酸性増殖細菌(低pH適応菌)のATPase活性は、H^+特異的イオノホアであるFCCPによって顕著に促進され、最大活性を示すpH6.2では、FCCP非存在下の活性の約2倍となった。一方、中性増殖菌(非適応菌)のATPase活性は、低pH適応菌と比べて著しく低く、FCCPによる活性の促進も見られなかった。超高圧細胞破砕法で調製した膜は反転膜であることを考慮すると、FCCPによって上昇した活性が膜画分のH_+-ATPase量を反映していると考えられる。このことを確認するために、膜画分をSDS-PAGE分析およびウエスタンブロットを行った。低pH適応菌にはF1F0型ATPaseサブユニットと同じ抗原性を示す蛋白質が検出されたが、非適応菌には、これらの蛋白質はほとんど検出されなかった。この様にATPase含有量が異なるにもかかわらず、両細胞ともグルコース賦活化によるΔpH形成能と解糖活性には差異がなかった。両細胞のΔpH形成はFCCPによって消失したが、FCCPは低pH適応菌の解糖活性を非適応菌に比べて著しく促進した。これらの観察結果は、ATP産生系(解糖)とATP分解系(H^+-ATPase)との共役を強く示唆するものである。現在、この様な共役現象を詳細に解析中である。
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