| 研究概要 |
1)96穴マルチプレートを使用した限界希釈法によって、MSK骨肉腫細胞から9種のクローン株(C5.4D,C5.4E,C5.4G,C5.5A,C5.8B,C5.8G,C5.8H,C5.10C,C5.10H)を樹立した。
2)形態学的に、9種のクローン株は多角形あるいは紡鍾形の細胞で、各クロ-ン細胞株間に差異が認められた。また、同一のクローン細胞においてもある程度pleomorphismが存在した。
3)9種のクロ-ン細胞のアルカリフォスファターゼ活性はMSK母細胞の16%から308%と著しい格差がみられた。これらは各クローン細胞の産生するハイドロキシプロリン量、副甲状腺ホルモン(PTH)反応性との間に相関が認められなかった。しかし、各々の細胞株をラットへ再移植した場合、形成された骨肉腫の肺転移の確率と細胞の持つ酵素活性の強弱は相関すると考えられた。すなわち、高いアルカリフォスファターゼ活性を持ったクローン細胞を移植した場合、ラット肺に高率に転移腫瘍の形成が認められ、逆に低アルカリフォスファターゼ活性株は転移が認められなかった。
4)in vitroにおいて形成されたハイドロキシプロリン量も各クローン間で格差がみられたが、これらはそれぞれの細胞株の飽和細胞密度と相関した。このことから、少なくとも各クローン細胞のコラーゲン合成は細胞の多層化によって促進される可能性が示唆された。
5)副甲状腺ホルモン(PTH)に対する反応性をcyclic AMP量の上昇によって測定すると、9つのクローンは全て母細胞株MSKより反応性が高く、最も反応性のある亜株でMSK細胞の7倍のcyclic AMPの上昇を認めた。
6)PTH高反応性の亜株はラットに対するin vivo移植において豊富な軟骨を含む骨肉腫を再形成した。従来からPTHの標的細胞は分化した骨芽細胞であると考えられていたが、我々の実験結果から、それ以前の分化の段階にある軟骨形成に関与する細胞が高いPTH反応性を有する可能性が示された。
7)9つの亜株のうち数株について細胞が培養液中に放出するコラゲナーゼを測定し、高いコラゲナーゼ活性を検出した。
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