研究課題/領域番号 |
02671123
|
研究種目 |
一般研究(C)
|
配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
血液内科学
|
研究機関 | 東京大学 |
研究代表者 |
佐藤 典治 東京大学, 医科学研究所, 助教授 (90162461)
|
研究分担者 |
浅野 茂隆 東京大学, 医科学研究所, 教授 (50134614)
谷 憲三朗 (谷 憲三郎) 東京大学, 医科学研究所, 講師 (00183864)
|
研究期間 (年度) |
1990 – 1991
|
研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
|
配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1991年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1990年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
|
キーワード | 好中球 / アルカリフォスファタ-ゼ / 分子生物学 / アルカリフォスタファタ-ゼ / プロモ-タ- / 発現誘導 |
研究概要 |
我々は、好中球アルカリフォスファタ-ゼのプロモ-タ-領域をクロ-ニングしたが、これはハリスらの報告に基づいたものである。その後アルカリフォスファタ-ゼにもうひとつのプロモ-タ-が見つかったため、我々のクロ-ニングしたこのプロモ-タ-を用いてアルカリフォスファタ-ゼの誘導実験を行う前に、好中球ではどちらのプロモ-タ-が使われているかを決める必要が生じた。我々は、それぞれに特異的なプライマ-と共通のプライマ-を合成し、mRNAから合成したcDNAをPCR法で増幅することにより検討した。つまりハリスらが見つけたプロモ-タ-から転写が始まるものを骨型、もう一方を肝型と呼ぶが、これらは互いにエクソン1にするものの残りのエクソン2から12までは共通であることから、それぞれのエクソン1に特異的なプライマ-と共通のエクソン2に特異的なプライマ-を用いてPCR法で検討することが出来る。その結果好中球ではおもに骨型のプロモ-タ-から転写が開始されていることが判明した。 又CATをレポ-タ-としたプラスミッドをマウス骨髄細胞株NFS60に種々の条件で導入したところ、DEAEーデキストランのほうがelectroporationより効率がよいことが判明した。
|