| 研究課題/領域番号 |
02680163
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
代謝生物化学
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| 研究機関 | 藤田保健衛生大学 |
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研究代表者 |
原田 信広 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教授 (00189705)
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| 研究分担者 |
和田 和代 (山田 和代) 藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助手 (90080217)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1991
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| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1991年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1990年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | アロマタ-ゼ / エストロゲン合成酵素 / 転写調節 / JEGー3細胞 / CATアッセイ / チトクロ-ムPー450_<AROM> / BeWo細胞 |
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| 研究概要 |
アロマタ-ゼは生殖腺組織のみならず、種々の組織に局在し多様な生理作用に関わっている。またその発現は組織に依存して複雑に調節されている。本研究では、このように複雑に発現調節されているアロマタ-ゼ遺伝子の転写調節機構について解析を行った。すでに昨年度までのヒト絨毛膜癌BeWo細胞を用いた解析より、5'上流2.8Kbまでにおいては約500bp上流に唯一の基本的転写活性を担っていると思われる部位を同定したが、cAMPやTPAなど実際の転写制御因子による転写活性を担っているような部位は見い出されなかった。そこで本年度は、さらに13Kb上流域までを含むアロマタ-ゼ遺伝子を単離して、種々因子になる本酵素の転写調節を担うようなプロモ-タ-部位の検索を行った。しかしながらこの遺伝子5'上流域に、本実験系ではそのような部位を検出することは出来なかった。そこで本酵素の発現調節を調べるのにより適した培養細胞系を検索した。その結果、ヒト胎盤とかなり近い程度にまで本酵素を発現し、また同様な制御因子による発現制御を受けていると思われるヒト絨毛膜癌培養細胞、JEGー3が見い出された。この細胞はBeWo細胞と比較して定常状態及びcAMPやTPAなどによる誘導状態において本酵素をよく強く発現・誘導することが、活性及びmRNA転写レベルで確認された。そこで培養細胞について本酵素遺伝子5'上流の転写活性を調べてみた。その結果、従来の約500bp上流付近以上にさらに約2Kb上流付近にも基本的転写活性を担っている正のプロモ-タ-、また約1Kb上流付近には負のプロモ-タ-が検出され全。このように細胞に依存してその基本的転写活性さえも複雑に変化していることが明らかになった。しかしながらやはりこの細胞においても種々の因子による転写調節を説明できるような部位は見い出されなかった。現在、転写開始点上流域、さらに下流域を含めた広い範囲での検索を進めている。
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