| 研究課題/領域番号 |
02807200
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
乾 賢一 東京医科歯科大学, 医学部, 教授 (70034030)
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| 研究分担者 |
斎藤 秀之 東京医科歯科大学, 医学部, 助手 (40225727)
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| 研究期間 (年度) |
1990 – 1991
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| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1991年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1990年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | 小腸上皮細胞 / 腎尿細管上皮細胞 / 培養上皮細胞 / 輸送担体 / 経細胞輸送 / 有機カチオン / ジペプチド / プロトン共役輸送 / 刷子縁膜 / 吸収・分泌 |
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| 研究概要 |
尿細管刷子縁膜のH^+/有機カチオン逆輸送系(分泌)及び小腸刷子縁膜のH^+/ジペプチド共輸送系(吸収)を中心にして、薬物の吸収・分泌に関与する輸送担体の細胞・分子生物学的解析を進め、以下の成果を得た。
1.H^+/有機カチオン逆輸送系とH^+/ジペプチド共輸送系の基質認識能:抗悪性腫瘍剤ベスタチン(ジペプチド)の輸送は、小腸刷子縁膜ではH^+/ジペプチド共輸送系を、一方尿細管刷子縁膜では、H^+/ジペプチド共輸送系とH^+/有機カチオン逆輸送系を介することが示された。
2.培養腎上皮細胞LLCーPK_1による有機カチオンの経細胞輸送:テトラエチルアンモニウム(TEA)は多孔性フィルタ-上に培養したLLCーPK_1細胞シ-トの側底膜側から濃縮的に蓄積され、一方向性に頂側膜側へ分泌されること、この経細胞輸送は頂側膜液のpHに依存することが示された。更に頂側膜を介したTEAの輸送に伴って細胞内pHの低下が観察され、H^+とTEAとの交換輸送が直接的に証明された。以上より、LLCーPK_1細胞の側底膜及び頂側膜には有機カチオン輸送系が局在し方向選択的な経細胞輸送能(分泌)を発現していること、この輸送は頂側膜H^+/有機カチオン逆輸送系によって調節されていることが示唆された。
3.培養腸上皮細胞Cacoー2によるセフラジン及びベスタチンの経細胞輸送:Cacoー2細胞シ-トを介したセフラジン、ベスタチンの輸送は方向選択的であり、ジペプチド共存によって顕著に阻害されること、側底膜透過にも担体輸送系の関与していることが示された。これらの結果から、セフラジン及びベスタチンはCacoー2細胞の頂側膜H^+/ジペプチド共輸送系並びに側底膜特殊輸送系に認識され経細胞輸送されることが示唆された。
4.アフリカツメガエルの卵母細胞による外来mRNAの発現:Cacoー2細胞から抽出・精製したmRNAを卵母細胞に注入後、ベスタチン輸送を測定したところ、H^+勾配依存性のジペプチド輸送活性の発現を認めた。
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