| 研究課題/領域番号 |
03267211
|
|---|
| 研究種目 |
重点領域研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究機関 | 九州大学 |
|---|
研究代表者 |
中山 宏明 九州大学, 歯学部, 教授 (70047744)
|
|---|
| 研究分担者 |
下川 修 九州大学, 歯学部, 助手 (40136502)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1991
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1991年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1991年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
|
|---|
| キーワード | 大腸菌 / DNA相同組換え / RecF組換え経路 / RecQ蛋白 / DNAヘリカ-ゼ |
|---|
| 研究概要 |
大腸菌RecQ蛋白は相同組換えのRecFおよびRecE経路に関与すると考えられるDNAヘリカ-ゼである。本研究の目的はRecQヘリカ-ゼの酵素学的諸性質を調べ、組換え酵素としての特性を明らかにすることであるが、本年度は同じく組換え蛋白の一つである単鎖DNA結合蛋白(大腸菌SSB,ファ-ジT4 gene 32蛋白)との機能的相互作用を解明することを目標とした。大腸菌から既報の方法で精製したRecQ蛋白と、ファ-ジM13DNAから調製したヘリカ-ゼ基質から成る反応系を用いて調べたところRecQヘリカ-ゼによる2種鎖巻き戻し反応は、大量の(いわゆるStoichiometricな量の)RecQ蛋白を必要とし、かつ加えたRecQ量と反応した基質量の関係は著しいS字形を示すことが明らかとなった。一方これに単鎖DNA結合蛋白を加えると反応は強く促進され、その結果一定量の基質を巻き戻すに必要なRecQ量は約1/100に減少し、同時に上記のS字形の関係は通常の双曲線形となった。又大過剰の単鎖DNA結合蛋白を用いても、巻き戻し反応の阻害はまったく認められなかった。このような高度の単鎖DNA結合蛋白への依存性は他の既知ヘリカ-ゼにはみられないユニ-クな性質である。大腸菌における相同組換えの中心となるRecA蛋白によるStrand transferに対して、これらの蛋白が促進効果を示すと言われていることを考慮すると、相同組換え反応はSSBの濃度が高い細胞内環境で進行し、そのためそこではたらくRecQヘリカ-ゼがSSB依存性を示すという可能性が考えられた。
|
