| 研究課題/領域番号 |
03404019
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| 研究種目 |
一般研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
薬理学一般
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
遠藤 實 東京大学, 医学部(医), 教授 (50009990)
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| 研究分担者 |
大室 弘美 東京大学, 医学部(医), 助手 (00124470)
飯野 正光 東京大学, 医学部(医), 講師 (50133939)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
23,200千円 (直接経費: 23,200千円)
1992年度: 4,400千円 (直接経費: 4,400千円)
1991年度: 18,800千円 (直接経費: 18,800千円)
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| キーワード | 興奮収縮連関 / カルシウム / 骨格筋 / リアノジン / ドキソルビシン / 化学架橋 / 電気泳動法 / 興奮・収縮連関 / ドキソルビジン / 筋収縮 / カルシウムイオン / ライアノジン受容体 |
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| 研究概要 |
本研究では、骨格筋の興奮収縮連関のうちT管-小胞体連関機構に目標を絞り、現在我々が使用できる方法を駆使してこの機構の分子機序の解明を目指した。まず4量体として存在する微量のリアノジン受容体を、二次元電気泳動法により非変性状態でも解析が可能であることを明かにし、リアノジン受容体蛋白質の化学修飾の有無を解析できる方法を開発した。また、リアノジン受容体と密接に関連する蛋白質を同定するため、化学架橋法を行った。化学的に切断可能な架橋試薬を用い部分精製リアノジン受容体を架橋し、2、3、4量体の架橋産物を観察することが可能となった。テトラマーよりさらに大きな架橋産物は条件により観察された。これにはリアノジン受容体以外の蛋白質が含まれている可能性があり、構成成分を現在解析中である。リアノジン受容体の機能ドメインを明かにする目的で、カルパインによる限定分解を行った。リアノジン受容体はカルパインによりN末端から全長の約1/4の部分で切断を受け、これによってCa^<2+>放出速度が約2倍に促進されることが明かになった。また、節小胞体標本では、抑制効果を持つカルモジュリンがスキンドファイバー標本では促進効果も持つことをはじめて明かにした。ドキソルビシンは、Ca^<2+>放出チャネルを促進するとともに、紫外光によってCa^<2+>放出チャネルと共有結合を作るので、これを用いて機能修飾部位の決定を試みている。現在までの結果では、C末端から分子量にして20万以内に結合部位があることが示唆されている。また、生理実験と生化学実験を同一標本で行うため、カエル骨格筋Ca^<2+>放出チャネルの _CDNAをクローニングし構造を決定する試みを開始している。現在までの研究成果により、骨格筋興奮収縮連関の分子機構の解明に向けた基礎が整備された。
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