| 研究課題/領域番号 |
03454121
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
神経解剖学
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| 研究機関 | 愛知県心身障害者コロニー発達障害研究所 |
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研究代表者 |
大平 敦彦 愛知県心身障害者コロニー・発達障害研, 究所, 部長 (20101074)
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| 研究分担者 |
松井 ふみ子 愛知県コロニー, 発達障害研究所, 助手
渡辺 英治 愛知県コロニー, 発達障害研究所, 研究員 (30250252)
前田 信明 愛知県心身障害者コロニー, 発達障害研究所, 研究員 (90202308)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
4,500千円 (直接経費: 4,500千円)
1993年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1992年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
1991年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | プロテオグリカン / 脳 / 形態形成 / ニューロカン / モノクローナル抗体 / バレル / 体性感覚野 / in situ hybridization / ガイド分子 / コンドロイチン硫酸 / 脳の発達 / モノクロ-ナル抗体 / ラット |
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| 研究概要 |
1.合成ペプチドを用いた抗ニューロカン抗体の作製
生後10日のラット脳から単離した、220kDaのコア糖蛋白を持つコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG-220,ニューロカン)は、成熟脳では検出されない。私達は、CSPG-220とともにCSPG-150のコア蛋白をも認識するモノクローナル抗体1G2を作製した。他のグループの研究から、CSPG-150は、CSPG-220のC末端側の約半分に一致することが明らかとなった。N末端側の残り半分の分子を認識する抗体を作製する目的で、中央よりN末端側のアミノ酸配列(15残基)を持ったペプチドを化学合成し、常法に従ってウサギに免疫した。その抗血清は、CSPG-220のコア蛋白とともに、新たにCSPG-130を認識することが明らかとなった。脳の発達に伴うCSPG-130の量的変動をウェスタンブロットで調べたところ、CSPG-150の変動とほぼ一致した。この結果から、ニューロカンは、形態形成期の脳では主としてCSPG-220として、また成熟脳ではCSPG-150とCSPG-130に分かれた形で存在することが明らかとなった。
2.バレル形成過程におけるニューロカンの発現調節機構
モノクローナル抗体1G2を用いた免疫組織化学より、ニューロカンは、新生仔ラット大脳皮質に均質に分布していること、生後3日以降、大脳体性感覚野において、バレルの内空から消失していくことがわかった。新生仔ラットのヒゲを1列レーザーメスで焼却した場合には、そのヒゲに対応するバレルでは、このようなニューロカンの分布変化が起こらなかった。ニューロカンコア蛋白のcDNAの塩基配列をもとにRNA probeを作製し、in situ hybridizationにより、バレル領域でのニューロカンmRNAの発現量を調べたところ、激減していた。以上の結果から、ヒゲからの入力刺激が、中枢におけるニューロカンの産生を転写レベルで抑制することが示唆された。
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