| 研究課題/領域番号 |
03454186
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
ウイルス学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
山口 宣生 東京大学, 医科学研究所, 教授 (90012723)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
1992年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1991年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
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| キーワード | ヒトサイトメガロウイルス / DNA複製 / PCR / マイクロインジェクション / サイトメガロウイルス / 潜伏感染 / ウイルスDNA複製 |
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| 研究概要 |
マイクロインジェクションとPCRをくみあわせた新しいDNA複製検出系を開発し、HCMV Towne株のHindIII A断片(map unit0.4を中心とする24kb領域)中に、主としてLytic phaseに機能するDNA複製開始点(oriLyt)が存在することを明らかにした。
次に、ori活性をもつDNA断片を漸次短くし、上記のDNA複製検出系を用いて、HCMV oriLytの最小領域を決定した。HindIII A断片中の4.3kb領域(AatII-Sac I)は24kb断片と同様の効率で複製したが、この4.3kb領域の5'-側から1.3kb、3'-側から0.9kbをそれぞれ欠失させたところ、複製効率は低下した。このことはHCMV Towne株oriLytの5'-側、3'-側境界がそれぞれこれらの領域中に含まれることを示している。
さらにHCMVのゲノムDNAの複製様式を明らかにするために、HCMV oriLytを含むプラスミドのHCMV感染細胞内複製中間体の構造を、低濃度アガロースゲルによる電気泳動とゲルから直接にPCRする方法を開発して解析した。この方法を用いて、DNA複製中間体は少なくとも240kbのHCMVゲノムより大きな分子となっていることを明らかにした。この結果はHCMV oriLytからローリングサークル型のDNA複製がおきていることを示唆している。(なお、この研究には大学院生渡辺慎哉が協力した。)
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