| 研究課題/領域番号 |
03454252
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
循環器内科学
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| 研究機関 | 三重大学 |
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研究代表者 |
中野 赳 三重大学, 医学部, 教授 (60111879)
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| 研究分担者 |
伊藤 正明 三重大学, 医学部, 助手 (00223181)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
1991年度: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
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| キーワード | 血管平滑筋 / カルシウム / ミオシン軽砂 / フォスファターゼ / フォルボールエステル / エンドセリン / ミオシン軽砂キナーゼ / ミオシン軽砂フォスファターゼ / 平滑筋 / フォルボ-ルエステル / ミオシン軽鎖 / 燐酸化反応 |
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| 研究概要 |
血管平滑筋では、細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)上昇によるもの以外に、その上昇を伴わない収縮も起こり得ることが注目されている。そこで我々は種々の血管作動物質について細胞外Ca^<2+>非存在下に収縮を惹起するものをマグヌス法を用いて検索し、血管平滑筋の[Ca^<2+>]iをfura2を指示薬にして張力と同時に測定した。さらに平滑筋収縮弛緩に重要なミオシン軽鎖(MLC)の燐酸化および脱燐酸化について検討し、[Ca^<2+>]i上昇を伴わない収縮機序の解析を試みた。
1.細胞外Ca^<2+>非存在下に持続的収縮を示す血管作動物質の検索:1mM EGTAを含むCa^<2+>-free buffer中でnorepinephrine(NE)やcaffeineにより細胞内の貯蔵Ca^<2+>を枯渇させた血管条片について種々の血管作動物質を検討した結果、endothelin-1(ET-1),phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA),phorbol 12,13-dibutyrate(PDB)およびcaliculin-A(phosphatase inhibitor)等が比較的持続する収縮を示した。
2.[Ca^<2+>]iと張力の同時測定:Ca^<2+>-free buffer中においてNEは一過性の収縮と[Ca^<2+>]iの上昇を示したが、PDBやPMAは持続的な収縮を示したにもかかわらず[Ca^<2+>]iの上昇は見られなかった。
3.MLCの燐酸化:Ca^<2+>-free buffer中のET-1とPDBによる血管条片収縮時におけるMLCの燐酸化をautoradiographyおよびwestern blot法により解析した結果、ET-1による収縮は、非常に少なくはっきりしないが、PDBによる収縮にはMLCの燐酸化が見られた。MLC以外の燐酸化はそれほど顕著ではなかった。20-kDa MLCのpeptide mappingではPDBの燐酸化部位は、C-kinaseばかりでなくMLC-kinaseによる部位の燐酸化も強く見られた。
4.MLC-phosphataseの精製とintactな血管条片におけるMLC-phosphatase活性:ニワトリ砂嚢よりMLC-phosphataseを精製し58kDaと38kDaそれぞれ二つずつのsubunitsよりなることを示した。ET-1やPDBは少なくともこの精製された酵素には影響しなかったが、PDBはintactな血管条片のMLC-phosphatase活性を低下する傾向が見られ、[Ca^<2+>]i上昇を伴わない収縮にMLC-phosphatase活性変化が重要である事が示唆された。
以上、[Ca^<2+>]i上昇を伴わない収縮機序について概ね満足のいく結果が得られたが、skind fiberについてはその技術的因難さから十分な結果が得られなかった。
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