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生体内薬物濃度制御システムの開発研究、薬物代謝酵素の遺伝的多型性の解析を基礎として

研究課題

研究課題/領域番号 03557101
研究種目

試験研究(B)

配分区分補助金
研究分野 生物系薬学
研究機関北海道大学

研究代表者

鎌滝 哲也  北海道大学, 薬学部, 教授 (00009177)

研究分担者 伊東 進  北海道大学, 薬学部, 助手 (70223154)
横井 毅  北海道大学, 薬学部, 助教授 (70135226)
澤田 稔  北海道大学, 薬学部, 助手 (30215917)
北村 龍司  北海道大学, 薬学部, 助手 (40221212)
研究期間 (年度) 1991 – 1993
研究課題ステータス 完了 (1993年度)
配分額 *注記
10,800千円 (直接経費: 10,800千円)
1993年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1992年度: 3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
1991年度: 5,300千円 (直接経費: 5,300千円)
キーワードチトクロームP450 / Poor metabolizer / カフェイン / N-アセチル転移酵素 / 多型性 / CYP1A2 / CYP2D6 / CYP2C / チトクローム P450 / poor metabolizer / S-メフェニトイン / チトクロームP-450 / P-450IID6 / P-450IIC / 遺伝的多型性 / P-450IA2 / 薬物代謝酵素 / eytensive metabolizer
研究概要

(1)P4502D6について、スパルテインのin vivo代謝試験の結果、poor metabolizer(PM)を一例見いだした。このPMのゲノムDNAについて、塩基配列を解析した結果、エクソン9のヘム結合領域近くに、9塩基のインサーションを見いだした。このPMの家族解析の結果、父親はヘテロの欠損型(D型)、母親はヘテロで9塩基のインサーションを持つことが明らかになった。また、PM本人は、欠損型とインサーションの両方を併せ持つことが明らかとなった。
(2)P4501A2はフェナセチンやカフェインの代謝にかかわり、代謝能に多型性があることが示唆されている。そこで、1)カフェインを225人のボランティアに投与し代謝試験を行なった。その結果、約15%のヒトがPMと考えられるプロビットプロットの変曲点が得られた。次に2)10家族の2世代についてin vivo代謝試験を行い、PMが常染色体劣勢遺伝をすると、矛盾無く説明出来る結果が得られた。そこで3)in vivo試験において典型的なPMとextensive metabolizer(EM)であった2名について、ゲノムDNAの塩基配列を、PCR法を用いて検討した。その結果、エクソンまたは、エクソン-イントロジャンクション部分に、PMとEMでの差異は認められなかった。
(3)N-アセチル転移酵素について、カフェインin vivo代謝試験の結果、2相性のプロビットプロットが得られた。同一人からゲノムDNAを抽出し、PCR-RFLP法で判定を行なった。in vivo代謝試験でのPMはhomo変異型であった。また、hetero変異型の群とwild型の群との代謝能に明らかな有為差があることを見いだした。
(4)ヒトS-メフェニトイン代謝型チトクロームP450(P450IIC)のPMとEMについて、遺伝的代謝能の差異を遺伝子レベルで検討した。CYP2C9とCYP2C18について、cDNAレベルでの配列の差異を、比較検討した。その結果PM、EMで塩基配列に差は認められなかった。さらにヒト肝試料を用いて、in vitroでS-メフェニトイン代謝のPMとEMの判定を行なった。これらのヒト肝からRNAを調製し、CYP2C9とCYP2C18の発現量をRT-PCRで測定した。この値とS-メフェニトイン代謝能の相関を調べたところ、CYP2C18が高い相関を示した。

報告書

(4件)
  • 1993 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1992 実績報告書
  • 1991 実績報告書
  • 研究成果

    (66件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (66件)

  • [文献書誌] T.Yokoi et al.: "Identification of protein disulfide isomerase and calreticulin as autoimmune antigens in LEC strain of rats" Biochim.Biophys.Acta. 1158. 339-344 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Hashimoto et al.: "Gene structure of CYP3A4,an adult specific from of cytochrome P450 in human livers,and its transcriptional control" Eur.J.Biochem.218. 585-595 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Sakuma et al.: "Sex-relateddifference in the expression of cytochrome P450 in Hamsters cDNA cloning and examination for the expression of three distinct CYP2C cDNAs" Molecular Pharmacol.45. 228-236 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Sakuma et al.: "Molevular cloning and sequence analysis of hamster CYP2E1" Biochim.Bipophys.Acta. 1217. 229-231 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] E.Kashiyama et al.: "Stereoselective S-oxidation of flosequinan sulfide by rat hepatic flavin-containing monooxygenase 1A1 expressed in yeast" Biochem.Pharmacol.47. 1357-1363 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] E.Kashiyama et al.: "Stereoselective pharmacokinetics and chiral inversions of flosequinan enantiomers containing chiral sulfoxide in rats" Xenobiotica. 45. 228-236 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Kamataki et al.: "Proceeding on the Symposium on Experimental Animals and Pharmacology" Characters of house musk shrew(Suncus Murinus);Focusing on enzymes involved in drug metabolism(in press), (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T,.Kamataki: "Cytochrome P-450(second edition)" Metabolism of Xenobiotics, 292 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 1) Yasuko kanazawa, Mitsukazu Kitada, Toshiyuki Mori, Yoshikazu Inukai, Susumu Imaoka, Yoshihiko Funae and Tetsuya Kamataki: "Ascorbic acid deficiency decreases specific forms of cytochrome P-450 in liver microsomes of guinea pigs." Mol.Pharmacol. 39. 456-460 (1991)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 2) Toshiyuki Mori, Mitsukazu Kitada, Susumu Imaoka, Yoshihiko Funae and Tetsuya Kamataki: "The in vitro effects of lipid peroxidation on the content of individual forms of cytochrome P-450 in liver microsomes of guinea pigs." Pharmacol.Res.24(2). 143-148 (1991)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 3) Mitsukazu Kitada, Masaki Taneda, Koshiro Itahashi and Tetsuya Kamataki: "Four forms of cytochrome P-450 in human fetal livers Purification and their capacity to activate promutagens." Japan J.Cancer Res.82. 426-432 (1991)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 4) Masaki Kashiwada, Mitsukazu Kitada, Tomomi Shimada, Koshiro Itahashi, Kiyomi Sato and Tetsuya Kamataki: "Purification and characterization of acid form of glutathione-S-transferase in human fetal livers ; High similarity to placental form." J.Biochem.110. 743-747 (1991)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 5)Minoru Sawada, Ryuji Kitamura and Tetsuya Kamataki: "Stable expression of monkey cytochtome P-450IAI eDNA in Chinese hamster CHL cells and its application for detection of mutagenicity of aflatoxin B." Mut.Res.265. 23-29 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 6) Ryuuji Kitamura, Keiko Sato, Minoru Sawada, Susumu Ito, Mitsukazu Kitada, Masayuki Komori and Tetsuya Kamataki: "Stable expression of cytochrome P-450JHA7 cDNA in human breast cancer cell line MCF-7 and its application to cytotoxicity testing." Archs, Biochem.Biophys. 292. 136-140 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 7) Susumu Ito. Toru Yanagimoto, Sanae Tagawa, Hisashi Hashimoto. Ryuji Kitamura, Yasuaki Nakajima, Toshihiro Okochi, Seiichiro Fujimioto Junichi Uchino and Tetsuya Kamataki: "Genomic organization of human fetal specific P-450HIA7 (cytochrome P-450HFLa)-related gene (s) and interaction of ranscriptional regulatory factor with its DNA element in the 5 flanking region." Biochim, Biophys.Acta. 1130. 133-138 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 8) Kazuyuki Ubukata, Hiroaki Ohi, Mitsukazu Kitada and Tetsuya Kamataki: "A new form of cytochrome P-450 responsible for the mutagenic activation of 2-amino-3-methy-limidazo [4.5-r] quinoline (IQ) in human livers." Cancer Res.52. 758-763 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 9) Toru Yanagimoto, Susumu Ito, Dieter Muller-Enoch and Tetsuya Kamataki: "Mouse liver cytochrome P-450 (P-450HIAM1) : its cDNA cloning and inducibility by dexamethasone." Biochim.Biophys.Acta. 1130. 329-332 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 10) Masayuki Komori, Osamu Kikuchi, Mitsukazu Kitada and Tetsuya Kamataki: "Molecular cloning of monkey P-450IAI eDNA and expression in yeast." Biochim.Biophys.Acta. 1131. 23-29 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 11) Toshiyuki Mori, Ryuji Kitamura, Susumu Imaoka, Yoshihiko Funae, Mitsukazu Kitada and Tetsuya Kamataki: "Examination for lipid peroxidation in liver microsomes of guinea pigs as a causal factor in the decrease in the content of cytochrome P-450 due to ascorbic acid deficiency." Res.Commun.Chem.Pathol.Pharmacol.75. 209-218 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 12) Hironori Nakura, Susumu Ito, Hisashi Kusano, Hiroyuki Ishizone, Susumu Imaoka, Yoshihiko Funae, Tsuyoshi Yokoi and Tetsuya Kamataki: "Decrease in the content of cytochrome P-450HEI by fasting in liver microsomes of house musk shrew (suncus murinus)." Biochem.Pharmacol.43. 1907-1910 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 13) Hiroko Fukuta, Hiroaki Ohi, Taisuke Uchida, Masayuki Komori, Mitsukazu Kitada and Tetsuya Kamataki: "Toxicological significance of dog liver cytochrome P-450 : Examination with the enzyme expressed in Saccharomyces cerevisiae using recombinant expression plasmid." Mut.Res.269. 97-105 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 14) Mitsukazu Kitada, Toshiya Kato, Shigeru Ohmori, Tetsuya Kamataki, Koshiro Itahashi, F.Peter Guengerich, Tadaaki Rikihisa and Yoshio Kanakubo: "Immunochemical characterization and toxicological significance of P-450HFLb purified from human fetal livers." Biochim.Biophys.Acta. 1171. 301-305 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 15) Masayuki Komori, Osamu Kikuchi, Tsutomu Sakuma, Junko Funaki, Mitsukazu Kitada and Tetsuya Kamataki: "Molecular cloning of monkey liver cytochrome P450 cDNAs ; Similarity of the primary sequences to human cytochromes P450." Biochim.Biophys.Acta. 171. 141-146 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 16) Minoru Sawada, Ryuji Kitamura, Satoru Ohgiya and Tetsuya Kamataki: "Stable expression of guinea pig NADPH-cytochrome P450 reductase and monkey P4501A1 cDNAs in Chinese hamster cells : Establishment ofcell lines highly sensitive to aflatoxin B." Archs.Biochem.Biophys.300. 164-168 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 17) Mikako Narita, Eiichi Nagai, Hisao Hagiwara, Masaki Aburada, Tsuyoshi Yokoi and Tetsuya Kamataki: "Inhibition of B-glucuronidase by natural glucuronides of Kampo medicines using glucuronide of SN-38 (7-ethyl-10hydroxycamptothecin) as a substrate." Xenobiotica. 23. 5-10 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 18) Kunio Itoh, Teruyuki Kimura, Tsyuyoshi Yokoi, Susumu Itoh and Tetsuya Kamataki: "Rat liver flavin-containing monooxygenase (FMO) : cDNA cloning and expression in yeast." Biochim.Biophys.Acta.1173. 165-171 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 19) Minoru Sawada, Ryuji Kitamura, Takahiko Norose, Mitukazu Kitada, Koshiro, Itahashi and Tetsuya Kamataki: "Metabolic activation of aflatoxin B.by human placental microsomes." J.Tox.Sci.18. 129-132 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 20) Masayuki Komori, Ryuji Kitamura, Hiroko Fukuta, Hiroaki Inoue, Hiroshi Baba, Kunie Yoshikawa and Tetsuya Kamataki: "Transgenic Drosophila carrying mammalian cytochrome P-4501Af : An application to toxicological testing." Carcinogen.14. 1683-1688 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 21) Susumu Itoh and Tetsuya Kamataki: "Human Ah receptor cDNA : Analysis for highly conserved sequences." Nucleic Acids Res.21. 3578 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 22) Susumu Itoh, Sanae Tagawa, Minoru Sawada, and Tetsuya Kamataki: "High susceptibility to aflatoxin B,and benzo (a) pyrene of BALB3T3A31-1-1 cells expressing monkey CYP1A1" J.Tox.Sci.18. 207-210 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 23) Tsuyoshi Yokoi, Sekio Nagayama, Reiko Kajiwara, Yasuro Kawaguchi, Ryuya Horiuchi and Tetsuya Kamataki: "Idenitification of protein disulfide isomerase and calreticulin as autoimmune antigens in LEC strain of rats." Biochim.Biophys.Acta. 1158. 339-344 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 24) Toshiyuki Mori, Ryuji Kitamura, Susumu Imaoka, Yoshihiko Funae, Takashi Matsubara and Tetsuya Kamataki: "Increased CYP1A2 content and capacity to activate Glu-P-1 and Trp-P-2 in liver microsomes of scorbutic ODS rats." Carcinogen. 14. 2471-2475 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 25) Hisashi Hashimoto, Kenji Toide, Ryuji Kitamura, Masako Fujita, Sanae Tagawa, Susumu Itoh and Tetsuya Kamataki: "Gene structure of CYP3A4, an adult-specific form of cytochrome P450 in human livers, and its transcriptional control." Eur.J.Biochem.218. 585-595 (1993)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 26) Hironori Nakura, Susumu Itoh, Hisashi Kusano, Hiroyuki Ishizone and Tetsuya Kamataki: "Activities of drug metabolizing enzymes in liver of Suncus Murinus (Suncus) : Possible lack of N-acetyltransferase in liver cytosol." Phramacology. 48. 201-204 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 27) Tsutomu Sakuma, Miwa Takai, Tsuyoshi Yokoi and Tetsuya Kamataki: "Molecular cloning and sequence analysis of hamster CYP2EI." Biochim.Biophys.Acta. 1217. 229-231 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 28) Tsutomu Sakuma, Katsuyoshi Masaki, Susumu Itoh, Tsuyoshi Yokoi and Tetsuya Kamataki: "Sex-related defference in the expression of cytochrome P450 in hamsters : cDNA cloning and examination for the expression of three distinct CYP2C cDNAs." Mol.Pharmacol.45. 228-236 (1994)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Yokoi et al.: "Identification of protein disulfide isomerase and calreticulin as autoimmune antigens in LEC strain of rats" Biochim.Biophys.Acta. 1158. 339-344 (1993)

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] H.Hashimoto et al.: "Gene structure of CYP3A4,an adult specific form of cytochrome P450 in human ltuers,and its transcriptional control" Eur.J.Biochem.218. 585-595 (1993)

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Sakuma et al.: "Sex-related difference in the expression of cytockrome P450 in hamsters cDNA cloning and examination for the expression of three distinct CYP2C." Molecular.Pharmacol.45. 228-236 (1993)

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Sakuma et al.: "Molecular cloning and sequence analysis of hamster CYP2E1" Biochim.Biophys.Acta. (in press).

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] E.Kashiyama et al.: "Stereoselective S-oxidation of flosequinan sulfide by rat hepatic flavin-containing monoxygenase 1A1 expressed in ycast" Biochem.Pharmacol.(in press).

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] E.Kashiyama et al.: "Stereoselective pharmacokinetics and chiral inuersions of flosequinan enantiomers containing chiral sulforide in rats" Xenobiotica. (in press).

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Kamataki et al.: "Proceeding on the Symposium on Experimental Animals and Pharmacology" Characters of house muok shrew(Suncus Murinuo);Focusing on enzymes involued in drug metabolism(in press), (1993)

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Kamataki: "Cytochrome P-450(Second edition)" Metabalism of Xenobiotics, 292 (1993)

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      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Sawada,M.et al.: "Stable expression of monkey cytochrome P-450lA1 cDNA in Chinese hamster CHL cells and its application for detection of mutagenicity of aflatoxin B_1." Mutation Research. 265. 23-29 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Kitamura,R.et al.: "Stable expression of cytochrome P-450lllA7 cDAN in human breast cancer cell line MCF-7 and its applicationto cytotoxicity testing.Archs." Archs,Biochem.Biophys.292. 136-140 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Itoh.S.et al.: "Genomic organization of human fetal specific P-450lllA7(cytochrome P-450HFLa)-related gene(s)and interaction of transcriptional regulatory factor with its DNA element in the 5'flanking region." Biochim.Biophys.Acta.1130. 133-138 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Ubukata.K.et al.: "A new form of cytochrome P-450 responsible for the mutagenic activation of 2-amino-3-methy-limidazo[4,5-f] quinoline(IQ)in human livers." Cancer Res.52. 758-763 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Yanagimoto,T.et al.: "Mouse liver cytochrome P-450(P-450lllAM1):its cDNA cloning and inducibility by dexamethasone." Biochim Biophys Acta.1130. 329-332 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Komori,M.et al.: "Molecular cloning of monkey P-4501A1 cDNA and expression in yeast." Biochim Biophys Acta.1131. 23-29 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Mori.T.et al.: "Examination for lipid peroxidation in liver microsomes of guinea pigs as a causal factor in the decrease in the content of cytochrome P-450 due to ascorbic acid deficiency." Res.Commun.Chem.Pathal.Pharmacal.75. 209-218 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Nakura.H.et al.: "Decrease in the content of cytochrome P-450llE1 by fasting in liver microsomes of house musk shrew(suncus murinus)." Biochem.Pharmacal.43. 1907-1910 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Fukuta.H.et al.: "Toxicological significance of dog liver cytochrome P-450:Examination with the enzyme expressed in Saccharomyces cerevisiae using recombinant expression plasmid." Mut.Res.269. 97-105 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Ohgiya,S.et al.: "Six-base deletion occuring in messages of human cytochrome P-450 in the CYP2C subfamily results in reduction of tolbutamide hydroxylase activity." Biochem.Int.27. 1073-1081 (1992)

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      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Kitada,M.et.al.: "Immunochemical characterization and toxicological significance of P-450HFLb purified from human fetal livers." Biochim.Biophys.Acta.1117. 301-305 (1992)

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  • [文献書誌] Sawada.M.et al.: "Stable expression of mouse NADPH-cytochrome P450 reductase and monkey P4501A1 cDNAs in Chinese hamster cells:Establishment of cell lines highly sensitive to aflatoxin B_1." Archs Biochem.Biophys.300. 164-168 (1993)

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公開日: 1991-04-01   更新日: 2016-04-21  

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