| 研究概要 |
有毒渦鞭毛藻Alexandrium catenellaおよびA.tamarenseは,毎年麻痺性貝毒(PSP)を引き起こし水産増養殖ならびに食品衛生上大きな社会問題となっている。しかし本属の形態は酷似しているためその分類は極めて困難で,毒量も株により異なることから,簡便で客観的な識別法が急務となっている。本研究は,有毒渦鞭毛藻Alexandrium属の種内・種間ならびに有毒株をモノクローナル抗体を用いて免疫学的に識別するとともに,分子レベルで識別可能なDNAプローブを開発することを目的とした。
その結果以下のような研究成果が得られた。
(1)大船渡湾および田辺湾の底泥からAlexandrium属のシストを採取し,発芽後交配型を決定した後多くの無菌クローン培養株を得て,A.tamarenseとA.catenellaの大量培養系を確立した。
(2)両種の培養株を用いてPSP毒を抽出してHPLC分析を行なうことにより,毒量や毒組成の異なる代表株を選別した。
(3)既に著者らによって開発されたAlexandrium属に特異的なモノクローナル抗体を用いて各株の反応性を検討した結果,種内・種間識別が免疫学的に可能であることが明らかになった。
(4)本藻から50kbp以上の高分子DNAの分離精製法を初めて確立した。これを鋳型として,17SrRNA3'末端と24SrRNA5'末端に設定した1組のプライマーを用いてPCRを行った結果,両種のすべての株において約610bpのDNA断片が増幅された。本DNA断片は塩基配列によりITS1,5.8SおよびITS2領域を含んでいた。また制限酵素AluIおよびRsaIの解析により,種間において異なった制限酵素断片長多型が認められ,抗体による識別結果と一致した。両種間のITS領域において塩基置換率が高いことから,両種に特異的なDNAプローブが作製可能なことが明らかになった。
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