研究課題/領域番号 |
03670017
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研究種目 |
一般研究(C)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
解剖学一般
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研究機関 | 慶応義塾大学 |
研究代表者 |
相磯 貞和 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (60138013)
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研究分担者 |
平岡 芳樹 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80218768)
塩沢 昌英 慶應義塾大学, 医学部, 専任講師 (50170840)
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研究期間 (年度) |
1991 – 1993
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研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1992年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1991年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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キーワード | トランスジェニックマウス / 胎盤 / プロラクチン / 発現制御因子 |
研究概要 |
我々は下垂体前葉細胞および胎盤脱落膜細胞において組織特異的に産生・分泌されるプロラクチンに着目し、胎盤におけるプロラクチン遺伝子の組織特異的な発現制御と胎盤内プロラクチン産生細胞の局在する脱落膜の組織特異性を決定する因子の存在を明らかにするため、胎盤特異的なプロモーターが存在すると考えられる胎盤由来のヒトプロラクチン遺伝子5'側非翻訳領域断片をクローン化し、本領域を導入したトランスジェニックマウスを作製し、本領域とlinkさせて導入されたtransgeneによりヒト・プロラクチンの胎盤脱落膜細胞における特異的発現がこのトランスジェニックマウスにおいて認められるか否かを検討することにより、胎盤特異的にヒト・プロラクチンを発現させるプロモーターの存在の証明を試みた。 導入遺伝子コンストラクトとして我々がクローン化したヒトプロラクチン遺伝子の胎盤特異的制御領域と予想されるexon Oの5'側領域にレポーター遺伝子としてE.coliのlacZ遺伝子を接合させたものを用い、倒立顕微鏡下で雄性前核内にこのコンストラクト溶液をmicroinjectした。その後、受精卵を精管結紮雄マウスと一晩mateさせて作製した偽妊娠マウスの卵管内に移植してトランスジェニックマウスの作製を試みた。 トランスジェニックマウス作製初期においては、新生児マウスは全く得られず、出産時期を過ぎた偽妊娠マウスを解剖して死亡胎児が確認できる程度であった。しかし、microinjectするDNAの精製法の改善、及び移植操作の習熟により、偽妊娠マウスあたり、4〜6匹の仔マウスが得られるようになった。 現在、生まれた仔マウスの尾よりDNAを抽出し、サザンハイブリダイゼーションにより、スクリーニングを行っているところであり、得られたトランスジェニックマウスから、β-ガラクトシダーゼの活性を胎盤を中心として酵素組織化学的に検出することにより、胎盤特異的にヒトプロラクチンを発現させるプロモーターの存在の証明を引き続き行う予定である。
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