トランスジェニックマウスを用いた神経ペプチドの生理的,病態生理的意義に関する研究

• 研究課題/領域番号: 03671152
• 研究種目: 一般研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 内分泌・代謝学
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 乾 明夫 神戸大学, 医学部, 助手 (80168418)
• 研究分担者: 徳久 剛史 神戸大学, 医学部, 教授 (20134364)
• 研究期間 (年度): 1991
• 研究課題ステータス: 完了 (1991年度)
• 配分額: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 1991年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
• キーワード: トランスジェニックマウス / neuropeptide Y / 神経ペプチド

研究概要

1.マウス神経ペプチドcDNAのクロ-ニング
ラットneuropeptide Y(NPY)cDNAをプロ-グとして,マウス脳cDNAライブラリ-よりクロ-ニングを行なったが,NPY cDNAの一部構造しか得ることができなかった。そこでPCR法を用いて,NPY及びcholeystokinin(CCK)のcDNAクロ-ニングを行い,目的とするcDNAを得た。マウスのペプチド及びcDNAはその構造の判明していないものが多く,NPY cDNAについてはシ-クエンスを行なった。
2.マウスNPY遺伝子のクロ-ニング
ラットNPY cDNAをプロ-ブとして,マウスジェノミックライブラリ-のスクリ-ニングを行い 陽性のクロ-ンを得た。NPYゲノムの時に5^1側の十分に長いクロ-ンを選択し 現在構造解析中である。
3.プロモ-タ-の入手
3種類のプロモ-タ-の投与をうけることができた。Th_<ー1>ー1は中枢神経系に,GRFな視床下部に,そしてH2は全身全組織に過剰発現させることを目的とする。
4.コンストラクション,トランスフェクション
NPY cDNAとTh_<ー1>ー1プロモ-タ-の組みあわせを最初に行い COS細胞にトランスフェクトさせた。
5.マウス受精卵への注入
現在,NPY cDNAの受精卵への注入を終了したところである。