| 研究課題/領域番号 |
03807035
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 島根医科大学 |
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研究代表者 |
松原 和夫 (1992-1993) 島根医科大学, 医学部, 助教授 (20127533)
塩野 寛 (1991) 島根医科大学, 医学部, 教授 (20112451)
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| 研究分担者 |
塩野 寛 旭川医科大学, 医学部, 教授 (20112451)
赤根 敦 島根医科大学, 医学部, 助手 (70202520)
高橋 節典 島根医科大学, 医学部, 助手 (90032226)
木村 恒二郎 島根医科大学, 医学部, 教授 (30153191)
松原 和夫 島根医科大学, 医学部, 助教授 (20127533)
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| 研究期間 (年度) |
1991 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
1993年度: 300千円 (直接経費: 300千円)
1992年度: 400千円 (直接経費: 400千円)
1991年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | DNA分析 / 性別判定 / ポリメレース連鎖反応(PCR) / 性染色体 / アメロゲニン遺伝子 / ヘモグロビン / ヘマチン / ポリメレース・チェイン・リアクション(PCR)法 / DNA分解 / ポリメレ-ス・チェイン・リアクション(PCR)法 / DYZ1 / 縦列型反復配列遺伝子 / 単一コピ-遺伝子 |
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| 研究概要 |
X-Y相同遺伝子であるアメロゲニン遺伝子のPCR増複による性別判定はX遺伝子の検出が内部コントロールとなるため極めて有用であるが、シングルコピー遺伝子であるため感度が低く、そのためデュアルPCR法による検出感度の向上を検討した。その結果わずか0.005ngのDNA試料からの増幅が可能となったが、汚染・分解試料からは性別判定は依然不可能であった。
そこでそのような試料中の汚染物質の同定と汚染物質及び分解DNA断片の除去法の検討を試みた。まず腐敗死体から採取した分解DNA試料よりわずかに残存している高分子量DNAを回収するため、アガロースゲルからの泳動溶出法の応用を試み、高分子量DNA精製用のカラム・クロマトグラフィで精製したところ、デュアルPCR法で性染色体DNAの検出が可能となった。
汚染物質はピリジン・ヘモクロモーゲン分析からヘマチンの様なヘモグロビンの分解産物である可能性が示唆され、そのスペクトルや電気泳動における動態、PCRに対する阻害作用について検討を加え、ヘム-血清蛋白質複合体の消化産物である可能性が高いという結論を得た。
この汚染物質は限外濾過器Centricon 100などで除去可能であるが、同じくPCRを阻害する分解DNA断片は除去されないため、市販されているゲル濾過担体の中で最も分画範囲の大きいBio-Gel A-150mカラム・クロマトグラフィを使用して精製したところ、一部の汚染・分解試料からデュアルPCR法で性染色体DNAの検出が可能となった。
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