| 研究課題/領域番号 |
03J04823
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
眼科学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
谷戸 正樹 京都大学, ウイルス研究所, 特別研究員(PD)
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| 研究期間 (年度) |
2003 – 2005
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| 研究課題ステータス |
完了 (2005年度)
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| 配分額 *注記 |
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2005年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2004年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2003年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 網膜光障害 / 過酸化脂質 / 酸化ストレス / 神経保護 / アポトーシス / 網膜電図 / 4-ヒドロキシノネナール / 4-ヒドロキシヘキセナール / チオレドキシン / 網膜色素上皮細胞 / スルフォラファン / ゲラニルゲラニルアセトン / 視細胞 |
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| 研究概要 |
1,網膜光障害モデルにおける、脂質過酸化マーカーhydroxyoctadecadienoic acid(HODE)、(8-iso-prostaglandin F2a 8-iso-PGF2a)の検出。
(1)白色マウスに5000ルクス、2時間の白色光照射を行った。
(2)光照射後96時間目まで、経時的に眼球を摘出し、ガスクロマトグラフィーで、網膜内のHODE、8-iso-PGF2aを検出した。
(3)光照射24時間目に、有為なHODE、8-iso-PGF2aをの上昇が観察された。
(4)HODE、8-iso-PGF2aをは、生体で有効な新規網膜障害マーカーである。
2,網膜光障害における酸化修飾蛋白質の検出及び同定。
(1)暗環境下で飼育した白色ラットに5000ルクス3時間の白色光を照射した。
(2)光照射後48時間目まで経時的に眼球摘出し、網膜組織内でのアルデヒド修飾蛋白質量を、抗4-ヒドロキシノネナール、抗4-ヒドロキシヘキセナール抗体を用いたドットブロットウェスタンで解析した。
(3)光照射直後より、網膜あるいは網膜色素上皮において、修飾蛋白質量の上昇した。
(4)免疫組織染色によって、修飾蛋白質の蓄積が見られた網膜部位は、後のアポトーシス、あるいは細胞脱落部位と一致した。
(5)網膜サンプルを2次元電気泳動で展開し、抗4-ヒドロキシノネナール抗体を用いたウェスタンブロットを行い、ペプチドマスフィンガープリントの手法で、光照射によって、酸化修飾を受ける蛋白質を同定した。
(6)同定された蛋白質には、主として、エネルギー代謝、シャペロン、核酸代謝、フォトトランスダクションに関わる蛋白質が含まれていた。
(7)アルデヒドによる、蛋白質の修飾が、網膜光障害の惹起に関わる分子機構である可能性が示唆された。
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