| 研究課題/領域番号 |
04152131
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| 研究種目 |
がん特別研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究機関 | (財)癌研究会 |
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研究代表者 |
今井 高志 (財)癌研究会, 癌研究所・生化学部, 研究員 (50183009)
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| 研究分担者 |
中村 祐輔 (財)癌研究会癌研究所, 生化学部, 部長 (70217909)
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| 研究期間 (年度) |
1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
1992年度: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
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| キーワード | 癌抑制遺伝子 / ポジショナルクローニング / MEN1 / YAC / STS / エクソントラップ / Zooブロット |
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| 研究概要 |
多発性内分泌腺腫瘍症1型(MEN1)の原因遺伝子はリンケージ解析により11番染色体q13領域にマップされている。本研究ではこの範囲をコスミドとYACを用いてカバーし、それらのクローンからエクソントラップ法などを使って遺伝子を単離し、MEN1候補遺伝子を同定することを目的としている。
まず、MEN1遺伝子座をカバーするYACクローンを単離するために、この領域にマップされたコスミドマーカーをSTSs(SequenceTagged-Sites)化した。これまでにq13領域において合計33個のSTSsを作成(マーカーDNAのシークエンス、PCRプライマーの合成、PCR条件の最適化)した。次に、これらSTSsを使ってCEPH及び我々の作成したYACライブラリーをPCR法によりスクリーニングした。その結果これまでに15サイトを含む9個のYACクローン(1クローンが複数のSTSsを含む)を得た。現在これらクローンをパルスフィールドゲル電気泳動法により解析中である。
またq13領域に存在する遺伝子を同定するためにコスミド、YACより制限酵素切断断片を調製してスプライシングベクターpSPL1に組み込み、cos細胞に導入し、エクソンと思われる配列を回収(エクソントラップ)した。これまでに12個のエクソンと思われる断片を得た。さらに、3個のコスミドよりzooブロット法による哺乳動物間で保存されている配列の同定などにより150bp以上の長さをもったオープンリーディングフレームを得た。
これら合計15個の遺伝子の一部と思われる配列を用いて、現在cDNAライブラリーのスクリーニングを行なっている。
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