造血幹細胞株の樹立とその分化の分子生物的解析

• 研究課題/領域番号: 04247205
• 研究種目: 重点領域研究
• 配分区分: 補助金
• 研究機関: 大阪大学
• 研究代表者: 杉山 治夫 大阪大学, 医学部, 助手 (70162906)
• 研究分担者: 中川 雅史 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 相馬 俊弘 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 三宅 正剛 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 岡 芳弘 大阪大学, 医学部附属病院, 医員 ; 小川 啓恭 大阪大学, 医学部, 助手 (80194447)
• 研究期間 (年度): 1992
• 研究課題ステータス: 完了 (1992年度)
• 配分額: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円); 1992年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
• キーワード: 造血幹細胞株 / Abelsonウイルス

研究概要

許容温度(35℃)では,トランフォーム能を有するが,非許容温度(39℃)では,トランスフォーム能を大きく洞弱させる温度感受性変異Abelsonウイルス(ts A-MulV)の全ゲノムのDNA sequenceから,v-ablのkinase domain内の566番目のアミノ酸のロイシンからアルギニンへの変異が,温度感受性を示す原因であることがわかった。このts v-ablをクローニングし,retouviral vectorにつないだ。このretroviral vectorのLTRは,Mo-MuLVのLTRとは異なり,未分化細胞であるEC細胞中でも発現しうるMPSVを用いた.このretrovir
al vectorを,5-FUで処理したマウスの骨髄細胞に,in vitroで感染させ(lL-6+SCFの条件下で2日間培養→感染→さらに2日間同条件で培養),致死的に放射線照射マウスに,骨髄移植を行い,約1カ月後,骨髄細胞や脾細胞を,lL-6+SCF下で,許容温度(35℃)で培養し,cell line化をはかった。このように方法で樹立されたcell line,ASC-1は,許容温度では,芽球様の形態を示し,c-Kit,Sca-1,Thy-1及び,すべてのlineage markerは,陰性であったが,非許容温度で一週間培養すると,Gr-1やSca-1が出現した。また,致死的に放射線照射したマ
ウスに,このcell lineを輸注したところ,このcell lineは,Gr-1,Mac-1,TER119,Thy-1などのマーカーをもった細胞に分化することがわかった。以上より,このASC-1は,かなり未熟な細胞株であることが示唆された。

研究成果

• [文献書誌] Oka,T.,Shimizu,Y.,Tsukada,S.,and Sugiyama,H.: "Transitory expression of Thy-1 antigen in immature B cell lines." Immunological Investigations. 21. 85-92 (1992)
• [文献書誌] Tsukada,S.,Oka,Y.,and Sugiyama,H.: "Continuing Vγ_2 to Jγ_2 rearrangements of murine T cell receptor gamma genes in a B-committed immature cell line." Molecular Immunology. 29. 401-409 (1992)
• [文献書誌] Tsukada,S.,Oka,Y.,and Sugiyama,H.: "Nucleotide deletion of t cell receptor Vγ_2 and Jγ_2 coding sequences at Vγ_2-Jγ_2 junctions in immature B cell line." Molecular Immunology. 29. 857-861 (1992)
• [文献書誌] Shimizu,Y.,Oka,Y.,Ogawa,H.,Kishimoto,T.,and Sugiyama,H.: "Regulation of Thy-1 gene expression by the methylation of the 5'region of Thy-1 gene and intracellular regulatory factors in immature B cells." Immunological Investiations. 21. 183-191 (1992)
• [文献書誌] Soma,T.,Tsukada,S.,Oka,Y.,Kishimoto,T.and Sugeyama,H.: "A novel mutation within the kinase domain of V-abl gene responsible for temperature-sensitive colony-forming ability in sofu agar," Virology. (1993)
• [文献書誌] Komori,T.,Minami,Y.,Sakato,N.and Sugiyama,H.: "Biased use of two restricted V_H gene segments in V_H replacement." European Journal of Immunology. (1993)