| 研究課題/領域番号 |
04403023
|
|---|
| 研究種目 |
一般研究(A)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
応用微生物学・発酵学
|
|---|
| 研究機関 | 東京大学 |
|---|
研究代表者 |
山崎 眞狩 (山崎 真狩) 東京大学, 農学部, 教授 (60011889)
|
|---|
| 研究分担者 |
依田 幸司 東京大学, 農学部, 教授 (20143406)
高月 昭 理化学研究所, 主任研究員 (80011972)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1992 – 1994
|
| 研究課題ステータス |
完了 (1994年度)
|
| 配分額 *注記 |
20,300千円 (直接経費: 20,300千円)
1994年度: 3,800千円 (直接経費: 3,800千円)
1993年度: 6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
1992年度: 10,100千円 (直接経費: 10,100千円)
|
|---|
| キーワード | 酵母菌 / 蛋白質細胞内輸送 / コイルドコイル蛋白質 / Usol蛋白質 / ブレフェルディンA / 蛋白質細胞内輸送阻害剤 / フォリマイシン / 膜融合 / パン酵母 / 分裂酵母 / ユンカナマイシンA / SS33410 / コンカナマイシンA / 蛋白質膜通過 / ピュロマイシン / ブレフェルデインA / ブレフェルデインA耐性 |
|---|
| 研究概要 |
我々は従来、パン酵母を材料として37℃で小胞体からゴルジ体への蛋白質細胞内輸送が停止する温度感受性分泌変異株uso1を取得してその解析を進めてきた。Uso1蛋白質はその想定アミノ酸配列から1790アミノ酸(約200kDa)よりなりC末側1100アミノ酸はコイルドコイル状を呈していると推測されていた。精製Uso1蛋白質は物理化学的に確かに繊維状蛋白質として挙動した。更にその形状を電子顕微鏡で観察した(東大理学系研究科、若林健之教授との共同研究)ところ、Uso1蛋白質は予想どうり双頭と150nm程のロッド部分(コイルドコイル部分に相当)よりなる分子でミオシン重鎖の形状に酷似していることが判明した。しかし頭部にはATP結合配列はないのでモーター蛋白質ではなく、小胞体から出芽した輸送小胞がゴルジ体膜に融合する過程に関与する分子であることがサプレッサー遺伝子の解析から分かった。次いで蛋白質細胞内輪送阻害剤ブレフェルディンA(BFA)の作用点解明の為の研究を行なった。我々の以前の研究で、BFAは酵母Candida albicansにおいて小胞体とゴルジ体の間で蛋白質輸送を止めていることを明らかにしてきた。0.004%のSDS存在下では分裂酵母もBFAに感受性になることを見いだした。この条件下で多コピーで分裂酵母にBFA耐性を与える分裂酵母DNA断片を数種クローン化した。この内の一つの塩基配列を決定し、耐性に寄与する遺伝子bfr1^+を見いだした。多剤耐性遺伝子に似ており、BFA排出のポンプと考えられる。一方、BHK細胞-NDVウイルスの系で蛋白質細胞内輪送阻害剤を網羅的に探索する系を考案した。放線菌の1菌株の生産する物質、フォリマイシン(コンカナマイシンA)が小胞体からゴルジ体への蛋白質細胞内輸送を阻害することを見いだした。またフォリマイシンの作用機作はV型プロトンATPaseの阻害であることを明らかにした。また別の1放線菌の代謝産物として既知物質SS33410を見いだした。
|
