| 研究概要 |
昆虫培養細胞のクローニングは限られた細胞系でしか成功していなかったので,より汎用性のある方法の開発を目的とした。
1.単細胞分離法:単細胞を分離するためには,単細胞増殖用培地に〓〓した希釈細胞浮遊液から,倒立顕微鏡下で無菌的に先端を直径20μmになるように引き伸したガラスキャピラリーで吸引する方法が有効でまた効率も良く,十分実用的であった。
2.単細胞増殖用容器:分離した単細胞に培養細胞が分泌する増殖促進物質を供給しながら培養するために,メンブランフィルターで作った円筒をシャーレに接着した容器を作った。円筒内に分離した単細胞を入れ,周辺で親細胞通常培養を行い,ある程度の増殖が得られた。
3.単細胞増殖用ゲル化培地:精製寒天の1種であるSea Plagaeアザロース0.2%を含む培地での細胞生存率,コロニー形成率,細胞分裂率が良いことが判明したが,クローン分離には至らなかった。
4.単細胞増殖用馴化培地:クローニングする細胞系で7-10日間培養した培地上清と富栄養価培地MGM-450の等量混合培地で単細胞を増殖させることができた。しかし馴化培地を使ってもクワゴマダラヒトリ細胞のクローニングは成功しなかった。
5.クローンの特性:得られたクローンの特性を調べたところ、分離後比較的早期に形態,大きさなどが不均一になり,染色体数も大きな変異巾を示した。これらの変異は親細胞集団で見られるものと同様であった。また増殖性も親細胞集団と差がなかった。
6.クローンのウイルス感受性:アワヨトウ由来細胞系のクローンのキアシドクガ核多角体病ウイルス感受性を調べたところ,親細胞より多角体形成率の高いクローンがいくつか見られた。
7.クローンの保存:10%グリセリン添加で凍結保存可能であった。
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