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Cyclic GMP/G-kinaseによるリン酸化の基質となるタンパク質の同定

研究課題

研究課題/領域番号 04454148
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 薬理学一般
研究機関新潟大学

研究代表者

今井 昭一  新潟大学, 医学部, 教授 (60013869)

研究分担者 吉田 豊  新潟大学, 医学部, 講師 (40182795)
仲澤 幹雄 (中澤 幹雄)  新潟大学, 医学部, 助教授 (80143759)
研究期間 (年度) 1992 – 1993
研究課題ステータス 完了 (1993年度)
配分額 *注記
1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1993年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
キーワードcGMP / G-kinase / ブタ大動脈平滑筋 / Calmodulin / 240kDaタンパク / Heparin / IP_4 / IP_3受容体 / Concanavalin A / 240 kDaタンパク質 / 血管平滑筋 / イオンチャネル / cyclic GMP
研究概要

cGMP依存性タンパクリン酸化酵素(G-kinase)の基質であり、そのリン酸化とG-kinaseによる細胞膜Ca^<2+>-pumpの活性化との間に良い相関が認められるタンパクとしてブタ大動脈平滑筋から我々が見つけだした、分子量240 kDaのタンパクは、その後の研究で、calmodulin、concanavalin A、heparinに結合性を持つ事がわかり、Triton X-100で可溶化後、3段階(calmodulin、concanavalin A、heparin)のaffinity chromatographyにより、SDS-PAGE上、殆ど単一のバンドと見られるレベルまで精製できる事がわかったので、精製タンパクについて予備的なアミノ酸分析を行った所、同じくheparin結合性で、分子量も良く似た糖タンパクであるラット及びマウス小脳のinositol 1,4,5-trisphosphate(IP_3)受容体と、21個のアミノ酸配列が完全に一致する断片が見出された。そこで、IP_3結合性について検討を行った所、IP_3を単一部位に高い親和性で結合する事(IP_3の親和性は、IP_3の約1/60)、結合の比活性は精製につれ上昇する事、結合はIP_3受容体の桔抗薬であるheparinで完全に抑制される事、等が明かとなった。蔗精密度勾配遠心分離を行っても、IP_3結合活性は、240 kDaタンパクと常に行動を共にするので、240 kDaタンパク自身の性質である事は間違いない。又、240 kDaタンパクの沈降位置は、小脳から精製したIP_3受容体のそれとほぼ同じであるし、240 kDa蛋白質に比べると明らかに弱いが、小脳IP_3受容体もG-kinaseによってリン酸化される。しかしながら、240 kDaタンパクと小脳IP_3受容体とは、calmodulin結合性に違いがあるし(小脳IP_3受容体はcalmodulin非結合性)、予備的検討で、免疫学的にも両者の間には多少違いのある事がわかっており、240 kDaタンパクは、IP_3受容体ファミリーの一員であると考えられる。今后は、チャネル活性の有無等について検討を加えると共に、240 kDaタンパクによる細胞膜Ca_<2+>-pumpの活性化について更に詳しい検討を加えて行きたい。

報告書

(3件)
  • 1993 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (7件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (7件)

  • [文献書誌] D.-L.Luo,M.Nakazawa,T.Ishibashi,K.Kato,S.Imai: "Putative,selective inhibitors of sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-pump ATPase inhibit relaxation by nitroglycerin and atrial natriuretic factor of the rabbit aorta contracted by phenylephrine" The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 265. 1187-1192 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Ishibashi,M.Hamaguchi,K.Kato,T.Kawada,H.Ohta,H.Sasage,S.Imai: "Relationship between myoglobin contents and increases in cyclic GMP produced by glyceryl trinitrate and nitric oxide in rabbit aorta,right atrium and papillary muscle" Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 347. 553-561 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.-L.Luo et al.: "Putative, selective inhititors of sarcoplasmic reticulum Ca^<32+>-pump ATPase inhibit relaxation by nitroglycerin and atrial natriuretic factor of the rabbit aorta contracted by phenylephrine" The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 265(3). 1187-1192 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Ishibashi et al.: "Relationship between myoglobin contens and increases in cyclic GMP produced by glyceryl trinitrate and nitric oxide in rabbit aorta, right atrium and papillary muscle" Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 347(5). 553-561 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D.-L.Luo,M.Nakazawa,T.Ishibashi,K.Kato,S.Imai: "Putative,selective inhititors of sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-pump ATPase inhibit relaxation by nitroglycerin and atrial natriuretic factor of the rabbit aorta contracted by phenylephrine" The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 265. 1187-1192 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Ishibashi,M.Hamaguchi,K.Kato,T.Kawada,H.Ohta,H.Sasage,S.Imai: "Relationship between myoglobin contens and increases in cyclic GMP produced by glyceryl trinitrate and nitric oxide in rabbit aorta,right atrium and papillary muscle" Naunyn-Schmiedeberg's Archives of Pharmacology. 347. 553-561 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Yutaka Yoshida,Ji-Qun Cai and Shoichi Imai: "Plasma membrane Ca^<2+>-pump ATPase is not a substrate for cGMP-dependent protein kinase" Journal of Biochemistry. 111. 559-562 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書

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公開日: 1993-04-01   更新日: 2016-04-21  

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