| 研究課題/領域番号 |
04454192
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
寄生虫学
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| 研究機関 | 順天堂大学 |
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研究代表者 |
青木 孝 順天堂大学, 医学部, 教授 (20053283)
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| 研究分担者 |
嶋田 淳子 順天堂大学, 医学部, 助手 (20211964)
下河原(古島) 理江子 (古島 理江子 / 下河原 理江子) 順天堂大学, 医学部, 助手 (50146776)
高宮 信三郎 順天堂大学, 医学部, 助教授 (90138206)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
5,500千円 (直接経費: 5,500千円)
1993年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
1992年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
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| キーワード | Trypanosoma / glycosome / ピリミジン塩基生合成 / オロト酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ / カルバモイルリン酸合成酵素 / 遺伝子クローニング / 細胞内局在性 / 細胞分画 / オロト酸ホスホリボシルトランスフェラーセ / OMPデカルボキシラーゼ |
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| 研究概要 |
トリパノソーマ科原虫の核酸合成、特にピリミジンde novo合成は他の生物の場合と同様に6種の酵素の連続反応で進行する。本原虫類にのみ存在する特異な性質として、ピリミジン合成等5、第6段のorotate phosphoribosyltransferase(OPRT),orotidine 5'-phosphate decarbaxylase(OMP-DC)は特異な細胞小器官glycosomeに局在すると言われるが、詳細は不明な点が多い。そこでTrypa-nosoma cruziの培養型虫体epimastigotesの細胞分画を行ない、3800g沈殿、26000g沈殿、225000g沈殿および上清の酵素活性を測定し、電顕観察を行なった。その結果、両酵素活性は大部分26000g沈殿に回収され、同沈殿は電顕観察によりglycosomeと考えられる均一な一重膜袋状構造を含むことが判り、両酵素のglycosome膜結合性が強く示唆された。
以上の生化学的アプローチと平行して、分子生物学的方法により主にOPRT遺伝子のクローニングを試みた。得られた6個の候補DNA断片の内1個(1.3kb)を解析した結果、これにはHinc IIサイトが2ヶ所存在した。このインサートのHinc II断片の1つ(600bp)の塩基配列を決定し、他種生物OPRTの塩基配列やアミノ酸配列と比較したが、ホモロジーは見られなかった。現在、残りのHinc II断片(700bp)の塩基配列を調べている。他の5個のインサートの長さは2.2kb,1.5kb,1.5kb,1.4kb,1.2kbであることが判ったので、今後、これらの塩基配列を決定し、OPRTをコードする遺伝子が存在するかを検討する予定である。
さらに、T.cruziのgDNA,cDNAを鋳型とし各種のプライマーを用いてPCRを行ない、ピリミジン合成第1段のcarbamoyl-phosphate synthetase II(CPS II)遺伝子の塩基配列を一部決めることが出来た。その結果、本酵素は単独蛋白である点は大腸菌の酵素に類似しているが、サブユニット構造をとらずsingle polypeptideである点は他の原核、真核生物に見られない独特な性質であることが判った。また、本酵素の成熟mRNAの5'端にはSL(spliced leader)が付加されること、すなわちtrans-splicingの機構が作用することが明らかになった。
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