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感染性cDNAを用いたパラミクソウイルスの複製機構と病原性発現機序の解析

研究課題

研究課題/領域番号 04454200
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 ウイルス学
研究機関三重大学

研究代表者

伊藤 康彦  三重大学, 医学部, 教授 (00022872)

研究分担者 河野 光雄  三重大学, 医学部, 助手 (00234097)
松村 治雄  三重大学, 医学部, 助手 (10229536)
鶴留 雅人  三重大学, 医学部, 助教授 (50159042)
研究期間 (年度) 1992 – 1993
研究課題ステータス 完了 (1993年度)
配分額 *注記
6,700千円 (直接経費: 6,700千円)
1993年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1992年度: 5,400千円 (直接経費: 5,400千円)
キーワードパラミクソウイルス / パラインフルエンザウイルス / 感染性cDNA / RNAレプリコン / HPIV-2 / 発現ベクター
研究概要

まず最初に、パラミクソウイルスの最長の遺伝子であるL遺伝子の塩基配列を決めた。これにより、NP,P遺伝子とともに、replication complex、を構成する全因子の配列がわかり、感染性cDNA作製の一歩を踏み出した。続いて、PIV-2のP遺伝子とムンプスウイルスNP遺伝子の一部を結合した人工遺伝子を作製し、そのRNA転写物をPIV-2感染細胞にトランスフェクトし、その蛋白の合成を確立し、この系を用いてRNA-editing機構の解析を行った。HeLa細胞にPIV-2を約m.o.i.5で感染させ、そのPIV-2感染HeLa細胞をヘルパー細胞として用い、RNA転写物をトランスフェクトし、その産物を検出しようとした。このヘルパーウイルス系を用いる方法では、他の細胞系でも行ってみたがいずれの組み合わせでも発現効率は低く、蛍光抗体法で約10000個に1個程度の細胞にしかその産物が検出できなかった。ワクチニアウイルスのDNAにT7ポリメラーゼ遺伝子の組み込まれたリコビナントワクチニヤウイルス(以下単にワクチニヤウイルスと記載する)とbluescript vector内にPIV-2の各ポリメラーゼユニット(NP,P,L)を組み込んだコンストラクトを用いて以下の様な発現系を確立した。HeLa細胞にワクチニアウイルスを約m.o.i.2で感染させ、1時間後に各ポリメラーゼユニット(NP,P,L)を組み込んだコンストラクトとPIV-2-P(MuV-NP)コンストラクトをリポフェクチン法を用いてトランスフェクトした。5-10時間後に10%FCSを含むDMEMを添加し、更に24時間培養後,cell-lysateを作製し、ウエスタンブロット法および蛍光抗体法により解析を行った。このシステムを用いて初めて、再現性良く高効率でRNAレプリコン活性を発現できるようになった。今後この系と完全長クローンを用いて、cDNAから感染性ウイルスを作製する系を完成されるつもりである。

報告書

(3件)
  • 1993 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (27件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (27件)

  • [文献書誌] S.Kusagawa et al.: "Antigenic and molecular properties of Murayama virus isolated from cynomolgus monkeys:The virus is closely related to avian paramyxovirus type 2." Virology. 194. 828-832 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M.Kawano et al.: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41:Presence of irregular deletions near the RNA-editing sites of paramyxoviruses." J.Gen.Virology. 74. 911-916 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Y.Furuichi et al.: "Some characteristics of an alpha-amylase inhibitor from phaseolus vulgaris(Cultivar great Northern)seeds." Biosci.Biotech.Biochem.57. 147-148 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Y.Ito et al.: "HN proteins of human parainfluenza type 4A virus expressed in cell lines transfected with a cloned cDNA have an ability to induce interferon a/b in mouse spleen cells." J.Gen.Virology. (in press).

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Tsumura et al.: "The character od endogenous retrovirus in pancreatic b-cells of NOD mice." Lab.Anim.Sci. (in press).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] H.Ohta et al.: "Molecular and Biological Characterization of Fusion Regulation Proteins(FRPs):Anti-FRP MAbs Induced HIV-Mediated Cell Fusion via an Integrin System" EMBO J.(in press).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyahara, K., Kitada, S., Yoshimoto, M., Matsumura, H., Kawano, M., Komada, H., Tsurudome, M., Kusagawa, S., Nishio, M., and Ito, Y.: "Molecular evolution of human paramyxoviruses. Nucleotide sequence of the human arainfluenza type 1 virus NP and M protein genes and construction of phylogenetic trees for all the human paramyxoviruses.2." J.Gen.Virol.124. 255-268 (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogawa, M., Mutsuga, N., Tsurudome, M., Kawano, M., Matsumura, H., Kusagawa, S., Komada, H., Nishio, M., and Ito, Y.: "Nucleotide sequence analysis of the simian virus 41 gene encoding the large (L) protein and construction of a phylogenetic tree for the L proteins of paramyxoviruses." J.Gen.Virol.73. 2743-2750 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tsurudome, M., Gluck, R., Graf, R., Falchetto, R., Schaller, U., and Brunner, J.: "Lipid interactions of the hnmagglutinin HA2 N-terminal segment of influenza virus-induced membrane fusion." J.Biol.Chem.267. 20225-20232 (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Komada, H., Kusagawa, S., Orvell, C., Tsurudome, M., Nishio, M., Bando, H., Kawano, M., Matsumura, H., Norrby, E., and Ito. Y.: "Antigenic diversity of human parainfluenza virus type 1 isolates and their immunological relationship with Sendai virus revealed by using monoclonal antibodies." J.Gen.Virol.73. 875-884 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Higuchi, Y., Miyahara, Y., kawano, M., Tsurudome, M., Matsumura, H., Kusagawa, S., Komada, H., Nishio, M., and Ito.Y.: "Sequence analysis of the large (L) protein of simian virus 5." J.Gen.Virol.73. 1005-1010 (1992)

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      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ito, Y., Komada, H., Kusagawa, S., Tsurudome, M., Matsumura, H., Kawano, M., Ohta, H., and Nishio, M.: "Fusion regulation proteins on the cell surface : Isolation and characterization of monoclonal antibodies which enhance giant polykaryocyte formation in Newcastle disease virus-infected cell lines of human origin." J.Virol.66. 5999-6007 (1992)

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    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kusagawa, S., Komada, H., Mao, X., Kawano, M., Nishikawa, F., Tsurudome, M., Matsumura, H., Ohta, H., Yuasa, T., Nishio, M., and Ito, Y.: "Antigenic and molecular properties of Murayama virus isolated from cynomolgus monkeys : The virus is closely related to avian paramyxovirus type 2." Virology. 194. 828-832 (1993)

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    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kawano, M., Tsurudome, M., Oki, N., Nishio, M., Komada, H., Matsumura, H., Kusagawa, S., Ohta, H., and Ito, Y.: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41 : presence of irregular deletions near the RNA-editing sites of paramyxoviruses." J.Gen.Virol.74. 911-916 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ito, Y., Bando, H., Komada, H., M.Tsurudome, M., Nishio, M., Kawano, M., Matsumura, H., Kusagawa, S., Yuasa, T., Ohta, H., Ikemura, M., and Watanabe, N.: "HN proteins of human parainfluenza type 4A virus expressed in cell lines transfected with a cloned cDNA have an ability to induce interferon a/b in mouse spleen cells." J.Gen.Virol. (in press).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1993 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.Kusagawa et al.: "Antigenic and molecular properties of Murayama virus isolated from cynomolgus monkeys:The virus is closely related to avian paramyxovirus type 2." Virology. 194. 828-832 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] M.Kawano et al.: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41:Presence of irregular deletions near the RNA-editing sites of paramyxoviruses." J.Gen.Virology. 74. 911-916 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Furuichi et al.: "Some characteristics of an alpha-amylase inhibitor from phaseolus vulgaris(Cultivar great Northern)seeds." Biosci.Biotech.Biochem.57. 147-148 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Y.Ito et al.: "HN proteins of human parainfluenza type 4A virus expressed in cell lines transfected with a cloned cDNA have an ability to induce interferon a/b in mouse spleen cells." J.Gen.Virology. (in press).

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] H.Tsumura et al.: "The character od endogenous retrovirus in pancreatic b-cells of NOD mice." Lab.Anim.Sci. (in press).

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] H.Ohta et al.: "Molecular and Biological Characterization of Fusion Regulation Proteins(FRPs):Anti-FRP MAbs Induced HIV-Mediated Cell Fusion via an Integrin System" EMBO J.(in press).

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] 河野 光雄.鶴留 雅人.沖 尚弘.西尾 真智子.駒田 洋.松村 治雄.草川 茂.太田 尚孝.伊藤 康彦: "Sequence determination of the P gene of simian virus 41: Presence of irregular deletions hear the RNA-edting sites of paramyxoviruses." Journal of General Virology.

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] 伊藤 康彦.駒田 洋.草川 茂.鶴留 雅人.松村 治雄.河野 光雄.太田 尚孝.西尾 真智子: "Fusion regulation prcteins on the cell surface: Isclation and characterization of monoclonal anribodies which enharce giant polykaryoayte formation in NDV-infected cell lihnes of human origin" Journal of Virology. 66. 5999-6007 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] 小川 昌弘.六鹿 典子.鶴留 雅人 河野 光雄.松村 治雄.草川 茂 駒田 洋.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Nucleotide sequence analysis of the simian virus 41 gene encoding the large (L) protein and construction of a phylogenetic tree for the L proteins of paramyxoviruses" Journal of General Virology. 73. 2743-2750 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] 樋田 泰光.宮原 慶裕.河野 光雄.鶴留 雅人.松村 治雄.草川 茂.駒田 洋.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Sequence analysis of the large (L) protein of simian virus 5" Journal of General Virology. 73. 1005-1010 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] 駒田 洋.草川 茂.Claes Orvell.鶴留 雅人.西尾 真智子.伴戸 久徳.河野 光雄.松村 治雄.Erling Nirrby.伊藤 康彦: "Antigenic diversity of human parainflueuza virus type 1 isolates and their immunological relatiouship with Sevdai virus revealed by using monoclonal antibodies" Journal of General Virology. 73. 875-884 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] 宮原 研吾.北田 清吾.吉本 桃子.松村 治雄.河野 光雄.駒田 洋.鶴留 雅人.草川 茂.西尾 真智子.伊藤 康彦: "Molecular evolution of human paramyxoviruses. Nucleotide sequence of the human parainfluenza virus type 1 virus NP and M protein genes and construction of phylogenetic trees for all the human paramyxoviruses." Archives of Virology. 124. 255-268 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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