| 研究課題/領域番号 |
04454304
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| 研究種目 |
一般研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
精神神経科学
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| 研究機関 | 札幌医科大学 |
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研究代表者 |
深津 亮 札幌医科大学, 医学部, 助教授 (10113614)
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| 研究分担者 |
藤井 充 札幌医科大学, 医学部, 講師 (80199299)
高畑 直彦 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20000987)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
1993年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
1992年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
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| キーワード | アミロイド前駆体蛋白 / アミロイドβ蛋白 / 細胞内輸送 / galactosyltransferase / ERGIC53 / Monensin / BrefeldinA / 遺伝子導入 / アルツハイマー病 / 細胞内輸送システム / 細胞内処理過程 / beta蛋白 / アミロイド / モノクローナル抗体 / 細胞内輸送経路 / レーザー顕微鏡 |
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| 研究概要 |
アミロイド前駆体蛋白(APP)が、どの様な細胞内輸送と処理を受けてアミロイドβ蛋白(Aβ)が生成されるかについて検討を加えた。
1.細胞内小器官の特異蛋白に対する抗体の樹立:
小胞体、Golgi装置、リソソームに特異的蛋白、ERGIC53、galactosyltransferase,、cathepsin Dのペプチドを合成して特異抗体を作成した。
2.培養細胞におけるAPPの細胞内輸送経路の検討:
1)蛍光顕微鏡的解析:APP、Aβの免疫反応性はER、ならびに細胞表面、小胞様構造、細胞内小胞で観察された。
2)細胞内局在に関する生化学的解析:細胞画分にウェスタンを行うと、ミクロゾーム分画に50、20 kDaのamyloidogenicな断片と4kDa前後のAβが検出された。
3.Monensin並びにBrefeldinAのAPPの細胞内輸送への影響:
BrefeldinA、Monensinは、ERおよびGolgiからの蛋白輸送を阻害する。BrefeldinAを添加すると、核周囲に空胞が見られERGIC53抗体で染色され、4kDa前後のAβが検出された。Monensinの場合には、Golgi周囲に空胞が出現し、APP抗体並びにGolgi抗体で染色され、4kDaのAβバンドが減少した。
4.APPcDNAの強制発現と細胞内輸送経路:
野生型(APP770)及び、変異型(Swedish型)cDNAをHeLa細胞に強制発現させた。
1)蛍光顕微鏡による解析:遺伝子導入後、APPの免疫反応はER、ならびに細胞表面、小胞様構造で増強した。
2)細胞内局在に関する分子生物学的生化学的検討:遺伝子導入後mRNAは3-6倍発現した。4kDaのAβバンドは若干増強していた。
以上の所見はGolgi前後の細胞内小器官、つまりER、あるいはリソソームの一方か両方において、APPからAβが生成されることを示唆する重要な所見と考えられる。
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