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カリクレイン・キニン系の研究:遺伝的キニノゲン欠損ラットを用いた解析

研究課題

研究課題/領域番号 04454534
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 生物系薬学
研究機関北里大学

研究代表者

大石 幸子  北里大学, 薬学部, 教授 (70050416)

研究分担者 宇都宮 郁  北里大学, 薬学部, 助手 (70168722)
八巻 幸二  北里大学, 薬学部, 助手 (70174597)
林 泉  北里大学, 薬学部, 講師 (90172999)
上野 晃憲  北里大学, 薬学部, 助教授 (00112657)
三田 征治  北里大学, 薬学部, 助手 (90200039)
研究期間 (年度) 1992 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
6,600千円 (直接経費: 6,600千円)
1994年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1993年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
1992年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
キーワードキニノゲン / キニノゲン欠損ラット / 点変異 / 分泌異常 / 高分子キニノゲン / 低分子キニノゲン / ブラジキニン / 一アミノ酸変異 / 尿キニン / B / N・KatholieK rat / カリクレイン・キニン系 / ブラウン・ノルウェイ・ラット / カラゲニン胸膜炎 / ワンポイントミューテーション / Brown Norway rat / 高血圧 / エンドトキシン / ブラジキニン・アンタゴニスト / 血管透過性亢進
研究概要

1.肝臓からのキニノゲンの分泌異常に関する研究:キニノゲン欠損ラットおよび正常ラットの肝臓細胞のプライマリ-カルチャーの実験において^<35>S-メチオニンの取込み後免疫沈降、SDS-PAGEによって解析した結果、両ラットともに高分子、底分子キニノゲンの生合成においては差はみられなかったが、明らかに欠損ラットの肝細胞では上清へのキニノゲンの分泌量が殆どみられず細胞内により多い量が認められた。また細胞内の局在を調べたところリソソーム分画に多いことが示された。これらの事実からB/N-Katholiek ratの肝臓ではキニノゲンは合成されるが、血中への分泌に異常があることがわかった。
2.遺伝的キニノゲン欠損ラットB/N-KatholiekのキニノゲンのcDNAクローニングとCOS細胞における発現の研究:キニノゲン欠損B/N-Katholiek ratおよび正常の同じストレーンのB/N-Kitasato ratの肝臓より、RNAをとりだし、既に報告された正常ラットの高分子キニノゲンcDNA配列を参考にプローブを作成してPCR法により、両ラットの高分子キニノゲンのcDNAを得た。両ラットのcDNA塩基配列の解析により、B/N-Katholiek ratの487番目の塩基のGからAへの変異がみいだされた。従ってこれから、高分子キニノゲンの163番目のアミノ酸においてアラニンからスレオニンへの点変異であることがわかった。そこでこの部位特異的変異を導入したプラスミドを構築しCOS-1細胞に導入し正常と変異キニノゲンの分泌を調べた。その結果A変異体を導入した細胞では高分子キニノゲンは分泌されず細胞内に多いのに対し、Gを含むプラスミドを導入した細胞では高分子キニノゲンは正常の場合同様培養上清中に分泌され、この一アミノ酸置換が分泌異常の原因であると推定された。
3.高分子キニノゲンおよび低分子キニノゲンの生体内での役割についての検討:カラゲニン胸膜炎の胸腔滲出液中のキニノゲンについてL鎖を認識する抗体を用いてウエスタンブロットを行った結果、高分子キニノゲンからキニンを遊離したキニノゲンが検出された。一方、ラットの尿中キニンはどのキニノゲン由来であるかを調べるために、キニノゲン欠損ラットを用いてキニノゲンをinfusionし、尿中にあらわれるキニン量を測定した。その結果、底分子キニノゲンをinfusionした場合が高分子キニノゲンの場合に比し、キニン量が有意に高値を示し、ラット尿キニンは血中の底分子キニノゲン由来であると推定された。

報告書

(4件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (30件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (30件)

  • [文献書誌] Hayashi,l.,Hoshiko,S.,Makabe,O.and Ohishi,S.: "A point mutation of ala・nine 163 to threonine is responsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen by the liver of Brown Norway Katholiek rats." J.Biol.Chem.,. 268. 17219-17224 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi,I.and Oh-ishi,S.: "Plasma kininogen deficiency:Associated defective secretion of kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats." J.Biochem.(Tokyo). 113. 531-537 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujie,H.,Hayashi,I.and Oh-ishi,S.20GB03:The kinin release from high molecular weight-kininogen is responsible for inflammatory exudation in rats: Life Sci.53. 1691-1701 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mimura,T.,Hayashi,I.,Hoshino,T.and Oh-ishi,S.: "Demonstration of high molecular-weight kininogen in kininogen-deficient ratkidneys." J.Biochem.(Tokyo),. 116. 59-63 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hagiwara,Y.,Kojima,M.,Hayashi,I.and Oh-ishi,S.: "Demonstration of derivation of rat urinary bradykinin from plasma low-molecular-weight kininogen:A study using kininogen-deficient rats." Biochem.Biophys.Res.Commun.204. 1219-1224 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tokumasu,T.,Ueno,A.and Oh-ishi,S.20GB06:A hypotensive response induced by des-Arg^9-bradykinin in young Brown/Norway rats pretreated with endotoxin.21GC06:Eur.J.Pharmacol.: 274. 225-228 (1995)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 分担:大石幸子(P11〜17,136〜150)上野晃憲(P.213〜221)林泉(P.168〜176): "キニンとアンギオテンシン" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi, I., Fujii, H., Mita, M.and Oh-ishi, S.: "Characterization of the heredity of kininogen deficiency in Brown Norway Katholiek strain rats." Life Sci.51. 135-142 (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Oh-ishi, S., Hayashi, I., Yamaki, K.and Utsunomiya, I.: "Kininogen deficiency in the rat." Agent.Action.38/I. 277-291 (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi, I., and Oh-ishi, S.: "Plasma kininogen deficiency : Associated defective secretion of kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats." J.Biochem.(Tokyo). 113. 531-537 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi, I., Hoshiko, S., Makabe, O.and Ohishi, S.: "A point mutation of alanine 163 to threonine is responsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen by the liver of Brown Norway Katholiek rats." J.Biol.Chem.268. 17219-17224 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fujii, H., Hayashi, I.and Oh-ishi, S.: "The kinin release from high molecular weight-kininogen is responsible for inflammatory exudation in rats" Life Sci.53. 1691-1701 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Mimura, T., Hayashi, I., Hoshino, T.and Oh-ishi, S.: "Demonstration odf high-molecular-weight kininogen in kininogen-deficient rat Kidneys." J.Biochem., (Tokyo). 116. 59-63 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hagiwara, Y., Kojima, M., Hayashi, I.and Oh-ishi, S.: "Demonstration of derivation of rat urinary brady-kinin from plasma low-molecular-weight kininogen." Biochem.Biophys.Res.Commun.204. 1219-1224 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tokumasu, T., Ueno, A.and Oh-ishi, S.: "A hypotensive response induced by des-Arg^9-bradykinin in young Brown-Norway rats pretreated with endotoxin." Eur.J.Pharmacol.274. 225-228 (1995)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hayashi,I.,Hoshiko,S.,Makabe,O.and Ohishi,S.: "A point mutation of ala nine 163 to threonine is responsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen" J.Biol.Chem.,. 268. 17219-17224 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Hayashi,I.and Oh-ishi,S.: "Plasma kininogen deficiency:Associated defec tive secretion" J.Biochem.(Tokyo). 113. 531-537 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Fujie,H.,Hayashi,I.and Oh-ishi,S.: "The kinin release from high molecular weight-kininogen" Life Sci.53. 1691-1701 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Mimura,T.,Hayashi,I.,Hoshino,T.and Oh-ishi,S.: "Demonstration of high molecular-weight kininogen in kininogen-deficient ratkidneys." J.Biochem.(Tokyo).116. 59-63 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Hagiwara,Y.,Kojima,M.,Hayashi,I.and Oh-ishi,S.: "Demonstration of derivation of rat urinary bradykinin trom plasma low-molecular-weight kininogen." Biochem.Biophys.Res.Commun.204. 1219-1224 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Tokumasu,T.,Ueno,A.and Oh-ishi,S.: "A hypotensive response induced by des-Arg^9-bradykinin" Eur.J.Pharmacol.274. 225-228 (1995)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 大石幸子・上野晃憲、林泉(分担): "キニンとアンギオテンシン" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] I.Hayashi & S.Oh-ishi: "Plasma Kininogen deficiency:Associated defective secretion of kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biochemistry. 113. 531-537 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Izumi Hayashi et al.: "A point mutation of alanine 163 to threonine is reponsible for the defective secretion of high molecular weight kininogen by the liber of Brown Norway Katholiek rats" Journal of Biological Chemistry. 268. 17219-17224 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroshi Fujie et al.: "The kinin release from high molecular weight-kininogen is responsible for inflammatory exudation in rats:Detection of kinin-free-kininogen in the exudate by immunoblot analysis" Life Sciences. 53. 1691-1701 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] I.Utsunomiya et al.: "Differential effects of indomethacin and dexamethasone on cytokine production in carrageenin-induced rat pleurisy" European Journal of Pharmacology. 252. 213-218 (1994)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] 大石幸子: "キニンとアンギオテンシン 生体調節の分子機構" 講談社サイエンティフィク, 278 (1994)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] I.Hayashi,H.Fujii,M.Mita and S.Oh-ishi: "Characterization of the heredity of Kininogen deficiency in Broun Norway Katholiek strain rats" Life Sciences. 51. 135-142 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] I.Hayashi and S.Oh-ishi: "Plasma Kininogen deficiency… Associated defective secretion of Kininogens by primary cultures of hepatocytes from Brown Norway Katholiek rats" J.Biochemistry(Tokyo). 113. (5)- (1993)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] T.Hoshino,I.Hayashi and S.Oh-ishi: "Presence of high molecular weight-Kininogen in rat Kidney and leukocytes" Japanese Journal of Pharmacology. 58. 415- (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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