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一般転写因子の分子生物学的手法による解析

研究課題

研究課題/領域番号 04454538
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 人類遺伝学
研究機関東京医科歯科大学

研究代表者

安河内 幸雄  東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 教授 (60037398)

研究分担者 千葉櫻 拓  東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助手 (30227334)
研究期間 (年度) 1992 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
7,300千円 (直接経費: 7,300千円)
1994年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1993年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
1992年度: 4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
キーワードTFIIF / CATアッセイ / リン酸化 / DEPolF複合体 / 染色体マッピング / RAP30 / 74 / DBPolF複合体 / バクテリア性RNA polymerase / HeLa細胞 / 一般転写因子
研究概要

TFIIFの機能ドメインはRAP74とRAP30のN末62〜171およびI1〜110アミノ酸領域がin vivoでの結合活性を有する最小のドメインであった。またin vitroの転写活性にはRAP74のN末73〜205およびC末356〜517アミノ酸領域が重要であることが判明した。多分前者の領域はRAP30との結合に、後者のそれは触媒活性に関与していることが示唆された。更にTFIIFの両サブユニット(RAP30およびRAP74)が翻訳後修飾をもうけていることを見いだした。大腸菌で発現させた組み替え体TFIIFはDSD-PAGE上、精製したnativeTFIIFより小さいが、後者をアルカリフォスファターゼ処理すると移動度が同じとなった。この脱リン酸化IIFは転写開始活性、開始複合体形成能、mRNA伸長反応すべてにおいて、リン酸化型より低い活性を示した。組み替え体とnativeのサブユニットからなるハイブリットIIFの解析から、RAP74のリン酸化が主要な効果をもち、転写活性をup-regulaをすることがわかった。最後にTFIIB,IID,IIEαおよびβ、RAP30およびRAP74はバクテリア・6ファクターに保存されている領域と類似したアミノ酸列を示す。そこで一つは真核生物における上記転写因子とRNAポリメレースII、大腸菌における6とRNAポリメレース・ユアは共通の機能によって相互作用しているか、もう一つはこれらの転写因子が共通の祖先から由来し、ヒト染色体のある一定の部分ルクラスターも形成しているかを追求した。組換え体サブユニットを大腸菌無細胞系に加えたところ、γRAP74はHela細胞由来TFIIFと同等の促進効果を示した。ヒトRAP74遺伝子はin situハイブリダイゼーションにより染色体19p13,3に、RAP30は4g31,2にマッピングされ、クラッターを形成していないことを示唆した。

報告書

(4件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (14件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (14件)

  • [文献書誌] Yonaha,M.: "Domain structure of a human general transcription factor TFIIF." Nuclec Acids Research. 21. 273-279 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Aso,T.: "Assignment of the humah GTF2FI gene to chromosome 19p13.3" Genomics. 16. 252-253 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitajima,S.: "Regulation of the human general transcription initiatign factor TFIIF by phosphorylation" Journal Biological Chemistry. 269. 29970-29977 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Chibazakura,T.: "Enhancement ofabacterial transcription inihation in vitro by the 74kDa subunit of human general transcription factor IIF(RAP74)" Biochimica et Biophysica Acta. 1219. 592-600 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 千葉櫻拓、北嶋繁孝、安河内幸雄: "転写因子研究法(分担:無細胞核抽出液の調整法、Hela細胞)" 羊土社, 224 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yonaha, M.et al: "Domain structure of a human general transcription factor TFIIF" Nucleic Acids Res.21. 273-279 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Aso, T.et al: "Assignment of the human GTF2F1 gene to chromosome 19pl3.3" Genomics. 16. 252-253 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitajima, S.et al: "Regulation of the human general transcription initiation factor TFIIF by phosphorylation" J.Biol.Chem.269. 29970-29977 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Chibazakura, T.et al: "Enhancement of bacterial transcription initiation in vitro by the 74-kDa subunit of human general transcription factor IIF (RAP74)" Biochim.et Biophys.Acta. 1219. 592-600 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kitajima,S.et.al.: "Regulation of the Human Transcription Initiation Factor TFIIF by Phospho rylation" J.Biol.Chem.269. 29970-29977 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Chibazakura et.al.: "Enhancement of bacterial transcription initialtion in vitro by the 74KPα Subunit of human general transcription factor IIF(RAP74)" Biochimica et Biophysica Acta. 1219. 592-600 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Aso,T.et.al.: "Assignment of the Hwman GTF2F1 Gene to Chromosome 19p13.3" Genomics. 16. 252-253 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Yonaka,M.et al.: "Domain structure of a human general transcription initiation facfor,TFIIF." Nucleic Acids Res.21. 273-279 (1993)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Aso,T. et al.: "Assignment of the human RAP74 gene to chromosome 19p13.3." Genemies.

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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