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ヒト染色体のDNA複製に要求されるヘリカーゼの単離

研究課題

研究課題/領域番号 04454612
研究種目

一般研究(B)

配分区分補助金
研究分野 分子遺伝学・分子生理学
研究機関奈良先端科学技術大学院大学 (1994)
大阪大学 (1992-1993)

研究代表者

釣本 敏樹  奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教授 (30163885)

研究期間 (年度) 1992 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
6,400千円 (直接経費: 6,400千円)
1994年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1993年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1992年度: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
キーワードDNAヘリカーゼ / DNA複製 / 二塩基反復配列 / 一本鎖DNA結合タンパク / DNAポリメラーゼ / 細胞核 / 複製タンパク質A / DUE配列 / 複製フォーク / 真核生物のDNA複製 / 複製開始点 / DNAポリメレース / 複製タンパク質
研究概要

複製に必要とされるDNAヘリカーゼの検索をヒト培養細胞より行なった。これまで真核生物から複数のDNAヘリカーゼが単離されているが、複製に要求されるものは明らかにされていない。そこで複製に要求される活性ということに視点を置いてDNAヘリカーゼ検索を行ない、以下の点が明らかになった。
1.DNAヘリカーゼを検索するために、この酵素活性依存的にDNA合成を開始するDNA配列をクローニングした。この配列には、二塩基反復配列があり、DNAをアンワインディングさせる機能を持っていた。
2.抗DNAポリメラーゼα抗体カラムに結合するタンパク質分画よりDNAヘリカーゼ活性(DNAヘリカーゼAA)を見いだした。この酵素は、見かけの分子量210kDa、3′->5′という反応の方向性を持ち、ヒト由来の一本鎖DNA結合タンパク質、RPA依存的であった。しかしこれ単独では、上記の反応で活性を示さなかった。
3.DNAヘリカーゼ基質を改良し、反応進行の連続性(processivity)の高いDNAヘリカーゼを検索した。この結果、細胞核に強く結合しているDNAヘリカーゼを見いだしDNAヘリカーゼn(nuclear)とした。DNAヘリカーゼnは、沈降係数9.2S、見かけ上の分子量190kDaを示した。この酵素を構成する110kDaのペプタイドにATPが結合し、反応の方向性は、3′->5′であった。DNAヘリカーゼnの活性はヒト由来のRPAに依存して活性を示し、RPAと特異的な相互作用により活性を持つと考えられる。既存のDNAヘリカーゼにはこれらの特性に対応するものがなく、DNAヘリカーゼnは新規のものと考えられる。特に複製タンパク質であるRPAに依存する点は、このDNAヘリカーゼが複製に関与することを強く示唆するものである。

報告書

(4件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (12件)

  • [文献書誌] R.A.Pack: "Isolation of human DNA-unwinding elements as sites of DNA polynerase α lprimase entry." Gene. 148. 277-284 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Fukuda: "Structure-function relation ship of the eukaryotic DNA replication factor.PCNA" J.Biol.Chem. (発売予定).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 釣本敏樹: "真核生物のDNA複製開始" 蛋白質核酸酵素. 39. 1667-1672 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 釣本敏樹: "複製タンパク質A(RPA)" Medical Immunology. 28. 141-146 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] R.A.Pack: "Isolation of human DNA-unwinding elements as sites of DNA polymerase alpha/primase entry." Gene. 148. 277-284 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Fukuda: "Structure-function relationship of the eukaryotic DNA replication factor, PCNA" J.Biol.Chem. in press.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T.Tsurimoto: "Initiation of eukaryotic DNA replication" Proteins, Nucleic Acids, Enzymes. 39. 1667-1672 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] "Replication proteinA (RPA)" Medical Immunology. 28. 141-146 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] R.A.Pack: "Isolation of human DNA-unwindingelements as sites of DNA polymevased/primase entry" Gene. 148. 277-284 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 釣本敏樹: "真核細胞のDNA複製開始" 蛋白質・核酸・酵素. 39. 1667-1672 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] 釣本敏樹: "複製タンパク質A" Medical Immunology. 28. 141-146 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] R.Pack & T.Tsurimoto: "Isolation of human DNA unwinding elements as sites of DNA polymerase α/primase entry" GENE. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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