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DNAプローブによる住血微生物感染症の早期診断と鑑別法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 04556043
研究種目

試験研究(B)

配分区分補助金
研究分野 応用獣医学
研究機関北海道大学

研究代表者

杉本 千尋  北海道大学, 獣医学部, 助教授 (90231373)

研究分担者 岡部 達二  微生物化学研究所(株), 主任研究員
高橋 清志  酪農学園大学, 酪農学部, 教授 (90048108)
小沼 操  北海道大学, 獣医学部, 教授 (70109510)
研究期間 (年度) 1992 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
15,300千円 (直接経費: 15,300千円)
1994年度: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
1993年度: 4,400千円 (直接経費: 4,400千円)
1992年度: 7,200千円 (直接経費: 7,200千円)
キーワードDNAプローブ / PCR / 住血微生物 / 原虫 / ウシ / リボゾームRNA / ストレス蛋白質 / hsp70
研究概要

本研究は、高感度で特異性の高い家畜の住血微生物病診断法の開発を目的として、DNA診断法(DNAプローブ、PCR)の開発と実用化を目指した試験研究である。Theileria sergentiについては、2種の蛋白質(p32、Hsp70)をコードするの遺伝子をクローニングしてその全塩基配列をそれぞれ決定した。特に、p32遺伝子をDNAプローブとして、末梢血液中の原虫の高感度検出を可能にした。さらに、T.sergenti遺伝子多型もこのDNAプローブを用いて解析を行い、野外株での多型性を明らかにした。これに引き続き、p32遺伝子を標的としたPCR法を開発した。本法を多数の野外検体に応用した結果、感度、特異性とも十分であることが確認された。また、T.sergenti p32の複数の対立遺伝子(Allele)型を特異的に増幅できるPCR法も開発し、これにより実験継代株あるいは野外株中に複数の遺伝子型が混在していることを明らかにした。また、本法によって、牛における持続感染や牛・ダニ間での感染サイクル中で原虫集団の変換が起こることが明らかにされた。このように、本研究で開発されたDNAプローブおよびPCRによる原虫検出法は、特異性・感度の点で極めて優れているのみならず、原虫遺伝子型解析も可能とした。本法は小型ピロプラズマ病の診断のみならず、各種の分子疫学的研究にも使える方法で、将来のワクチン開発へ向けての基礎的研究、野外の実態調査に広く応用できる方法であろう。なお、本研究で開発されたPCR法は実用化の段階まで開発が進み、野外での小型ピロプラズマ感染症の高感度診断法として普及しつつある。

報告書

(4件)
  • 1994 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (42件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (42件)

  • [文献書誌] TANAKA,M.: "Detection of Theileria sergenti infection in cattle by using polymerase chain reaction amplification of parasite specific DNA." Journal of Clinical Microbiology. 31. 2565-2569 (1993)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ALI,S.: "Protein characterization of Babesia equi piroplasms isolated from infected horse erythrocytes." Parasitology Research. 79. 639-643 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MATSUBA,T.: "Changes in the hybridization patterns of populations of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitololgy. 47. 215-223 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MATUBA,T.: "Analysis of mixed parasite populations of Theileria sergenti using cDNA probes encoding a major piroplasm surface protein." Parasitology,. 107. 369-377 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHONG,W.Z.: "Characterization of epitopes on a 32 kDa merozoite surface protein of Theileria sergenti." Parasite Immunology. 15. 113-119 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] KUBOTA,S.: "Molecular cloning and sequencing of hsp 70 cDNA of Theileria sergenti." Molecular and Biochemical Parasitology. 62. 317-318 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Analyses of antigenic diversities of Theileria sergenti piroplasm surface proteins" Journal of Veterinary Medical Science. 56. 469-473 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Alteration of ganglioside composition in erythrocytes associated with Theileria sergenti infection." Journal of Veterinary Medical Science. 56. 841-847 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] SUGIMOTO,C.: "Characterization of membrane proteins of Babesia equi piroplasm." Equine Infectious Diseases VII. (発表予定).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ONOUE,S.: "Prenatal infection with Theileria sergenti in calves." Journal of Protozoology Reserch. (発表予定).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Ganglioside as a possible receptor on the erythrocyte for Theileria sergenti." Journal of Veterinary Medical Science. (発表予定).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Antigenic alteration in major piroplasm surface proteins of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitology.(発表予定).

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] TANAKA,M.: "Detection of Theileria sergenti infection in cattle by using polymerase chain reaction amplification of parasite specific DNA." Journal of Clinical Microbiology. 31. 2565-2569 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ALI,S.: "Protein characterization of Babesia equi piroplasms isolated from infected horse erythrocytes." Parasitology Research. 79. 639-643 (1993)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MATSUBA,T.: "Changes in the hybridization patterns of populations of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitololgy. 47. 215-223 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] MATSUBA,T.: "Analysis of mixed parasite populations of Theileria sergenti using cDNA probes encoding a major piroplasm surface protein." Parasitology. 107. 369-377 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Characterization of epitopes on a 32 kDa merozoite surface protein of Theileria sergenti." Parasite Immunology. 15. 113-119 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] KUBOTA,S.: "Molecular cloning and sequencing of hsp70 cDNA of Theileria sergenti." Molecular and Biochemical Parasitology. 62. 317-318 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Analyzes of antigenic diversities of Theileria sergenti piroplasm surface proteins." Journal of Veterinary Medical Science. 56. 469-473 (1993)

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    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Alteration of ganglioside composition in erythrocytes associated with Theileria sergenti infection." Journal of Veterinary Medical Science. 56. 841-847 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] SUGIMOTO,C.: "Characterization of membyane proteins of Babesia equi piroplasm." Equine Infectious Diseases VII. (In press).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ONOUE,S.: "Prenatal infection with Theileria sergenti in calves." Journal Protozoology Research. in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Ganglioside as a possible receptor on the erythrocyte for Theileria sergenti." Journal of Veterinary Medical Science. in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Antigenic alteration in major piroplasm surface proteins of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitology. in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.KUBOTA: "A genetic analysis of mixed population in Theileria sergenti stocks and isolates using allele-specific polymerase chain reaction." Journal of Veterinary Medical Science. in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] TANAKA,M.: "Detection of Theileria sergenti infection in cattle by using polymerase chain reaction amplification of parasite specific DNA." Journal of Clinical Microbiology. 31. 2565-2569 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] ALI,S.: "Protein characterization of Babesia equi piroplasms isolated from infected horse erythrocytes." Parasitology Research. 79. 639-643 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] MATSUBA,T.: "Changes in the hybridization patterns of populations of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitololgy. 47. 215-223 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] MATSUBA,T.: "Analysis of mixed parasite populations of Theileria sergenti using cDNA probes encoding a major piroplasm surface protein." Parasitology,. 107. 369-377 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] ZHONG,W.Z.: "Characterization of epitopes on a 32 kDa merozoite surface protein of Theileria sergenti." Parasite Immunology. 15. 113-119 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] KUBOTA,S.: "Molecular cloning and sequencing of hsp70cDNA of Theileria sergenti." Molecular and Biochemical Parasitology. 62. 317-318 (1993)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Analyses of antigenic diversities of Theileria sergenti piroplasm surface proteins" Journal of Veterinary Medical Science. 56. 469-473 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Alteration of ganglioside composition in erythrocytes associated with Theileria sergenti infection." Journal of Veterinary Medical Science. 56. 841-847 (1994)

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] SUGIMOTO,C.: "Characterization of membrane proteions of Babesia equi piroplasm." Equine Infectious Diseases VII. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] ONOUE,S.: "Prenatal infection with Theileria sergenti in calves." Journal of Protozoology Research. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] WATARAI,S.: "Ganglioside as a possible receptor on the erythrocyte for Theileria sergenti." Journal of Veterinary Medical Science. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] ZHUANG,W.Z.: "Antigenic alteration in major piroplasm surface proteins of Theileria sergenti during infection." Veterinary Parasitology. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] S.KUBOTA: "A genetic analysis of mixed population in Theileria sergenti stocks and isolates using allele-specific polymerase chain reaction." Journal of Veterinary Medical Science. (発表予定).

    • 関連する報告書
      1994 実績報告書
  • [文献書誌] Wen Zhong Zhuong: "Characterization of epitopes on a 32 KDa merozoite surface protein of Theileria sergenti" Parasite Immunology. 15. 113-119 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] T.Matsuba: "Analysis of mixed parosite populationis of Theileria sergenti using cDNA probes encoding a major piroplasm surface protein" Parasitology. 107. 369-377 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] M.Tanaka: "Detection of Theileria sergenti infection in cattle by polymerase chain reaction amplification of parasite-specific DNA" Journal of Clinical Microbiology. 31. 2565-2569 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] S.Kubota: "Molecular cloving and sequencing of hsp70 cDNA of Theileria sergenti" Molecular and Biochemical Porositology. 62. 317-318 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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