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C型肝炎ウイルス遺伝子非構造領域NS3の発現産物を用いたプロテアーゼ阻害剤の開発

研究課題

研究課題/領域番号 04557125
研究種目

試験研究(B)

配分区分補助金
研究分野 応用薬理学・医療系薬学
研究機関国立予防衛生研究所

研究代表者

宮村 達男  国立予防衛生研究所, ウイルス2部, 部長 (90100099)

研究分担者 渡辺 勇四郎  聖マリアンナ医科大学, 第2内科, 助教授 (00081688)
片山 透  国立東京病院, 院長
鈴木 哲朗  国立予防衛生研究所, ウイルス2部, 研究員 (00250184)
研究期間 (年度) 1992 – 1994
研究課題ステータス 完了 (1994年度)
配分額 *注記
14,000千円 (直接経費: 14,000千円)
1994年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
1993年度: 3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
1992年度: 8,300千円 (直接経費: 8,300千円)
キーワードC型肝炎ウイルス / セリンプロテアーゼ / 抗ウイルス剤 / バキュロウイルス / プロテアーゼ / 分子生物学
研究概要

C型肝炎ウイルス(HCV)は約9400塩基よりなるプラス鎖RNAウイルスであり、遺伝子解析の結果よりフラビウイルス科に属すると考えられている。これらのウイルスに共通する特色として、1本の前駆体ポリプロテインから宿主細胞およびウイルス自身がコードするプロテアーゼによってプロセスされて複製される点が挙げられ、HCVに存在するセリンプロテアーゼをコードする領域(NS3)はウイルスの複製に必須であることが強く示唆される。申請者らはこのNS3がコードするプロテアーゼに対する阻害物質がHCVの増殖を妨げる抗ウイルス薬になりうると考え、以下に示す研究を行った。
(1)NS3遺伝子の一部または全領域を大腸菌及び昆虫細胞で発現させ、その遺伝子産物によるHCV蛋白質(NS5蛋白)の特異的切断を検討し、セリンプロテアーゼ領域を特定した。(2)HCVプロテアーゼをこルトース結合蛋白質との融合蛋白質の形で大腸菌で発現させ、可溶性の融合蛋白質を単離、精製することに成功した。またN末端側にヒスチジンタグシークエンスを付加することにより、ニッケルキレートカラムで効率よく精製することにも成功した。(3)昆虫細胞での発現では、N末端側に狂犬病ウイルスG蛋白質シグナルシークエンスを付加することにより発現量の著明な増加を見ることができた。また発現させた細胞を可溶化し、HCVプロテアーゼを部分精製することに成功した。(4)HCVプロテアーゼ及びその基質領域の遺伝子をヒト肝癌由来HepG2に導入し、薬剤選択により細胞株を樹立した。この細胞株において、HCV前駆体ポリプロテインの特異的なプロセシングを確認した。(5)大腸菌内で、既知のセリンプロテアーゼ阻害剤存在下にNS3プロテアーゼとNS5蛋白を同時発現させてその切断産物を検討した結果、TLCKに阻害活性を認めた。

報告書

(3件)
  • 1994 研究成果報告書概要
  • 1993 実績報告書
  • 1992 実績報告書
  • 研究成果

    (47件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (47件)

  • [文献書誌] Matsuura, Y. 他6名: "Expression of processed envelope protein of hepatitis C virus in mammalian and insect cells." J. Virol.66. 1425-1431 (1992)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyamura, T. 他1名: "Structural proteins of hepatitis C virus." Trends in Microbiology. 1. 229-231 (1993)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y. 他1名: "Molecular biology of hepatitis C virus." Seminars in Virology. 4. 297-304 (1993)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 宮村達男 他2名: "C型肝炎ウイルスの構造蛋白" ウイルス. 43. 275-283 (1993)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Koike, K. 他4名: "High-level expression of hepatitis B HBx gene and hepatocarcinogenesis in transgenic mice." Hepatology. 19. 810-819 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y. 他6名: "Characterization of HCV structural proteins expressed in various animal cells." Intervirology. 37. 114-118 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kim, D-W. 他6名: "Trans-suppression of gene expression by hepatitis C viral core protein." Jpn. J. Med. Sci. Biol.47. 211-220 (1994)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y. 他6名: "Processing of E1 and E2 glycoproteins of hepatitis C virus expressed in mammalian and insect cells." Virology. 205. 141-150 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Simmonds, P. 他44名: "A proposed system for the nomenclature of hepatitis C viral genotypes." Hepatology. 19. 1321-1324 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suzuki, R. 他7名: "Nuclesr localization of the truncated hepatitis C virus core protein deleted in its hydrophobio C-terminus." J. Gen. Virol.76. 53-61 (1995)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Aizaki, H. 他8名: "Genotyping of hepatitis C virus by simple ELISA method." Clin. Diag. Virol.3. 105-109 (1995)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suzuki, T. 他8名: "Hepatitis C virus infection and hepatocellular carcinoma." Liver. ( in press).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Harada, T. 他7名: "Characterization of an established human hepatoma cell line constitutively expressing nonstructural proteins of hepatitis C virus by transfection of viral cDNA." J. Gen. Virol.( in press).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kakimi, K. 他13名: "Helper T cell epitopes in the hepatitis C virus core region recognized by BALA/c and C54BL/6 mice." J. Gen. Virol.( in press).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Harada, S. 他6名: "Estabishment of a cell line constitutively expressing E2 glycoprotein of hepatitia C virus and humoral responce of hepatitis C patients to the expressed protein." J. Gen. Virol.( in press).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Amano, H. 他2名: "Identification and characterization of thymidine kinase gene of Yaba virus." J. Gen. Virol.( in press).

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y. 他8名: "Vaccine '93: Modern approaches to new vaccines including prevention of AIDS" Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 289-294 (1993)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyamura, T.: "Primary Liver Cancer: Etiological and Progression Factors" CRC Press, Inc., 125-135 (1994)

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      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y., et al.: "Expression of processed envelope protein of hepatitis C virus in mammalian and insect cells." J.Virol.66. 1425-1431 (1992)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyamura, T., et al.: "Structural proteins of hepatitis C virus." Trends in Microbiology. 1. 229-231 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y., et al.: "Molecular biology of hepatitis C virus." Seminars in Virology. 4. 297-304 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y., et al.: "Expression of NS1/E2 protein of HCV in mammalian and insect cells. Vaccine '93 : Modern approaches to new vaccines including prevention of AIDS.Brown, F., et al.(eds). Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, USA." 289-294 (1993)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Koike, K., et al.: "High-level expression of hepatitis B HBx gene and hepatocarcinogenesis in transgenic mice." Hepatology. 19. 810-819 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y., et al.: "Characterization of HCV structural proteins expressed in various animal cells." Intervirology. 37. 114-118 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kim, D-W., et al.: "Trans-suppression of gene expression by hepatitis C viral core protein." Jpn.J.Med.Sci.Biol.47. 211-220 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuura, Y., et al.: "Processing of E1 and E2 glycoproteins of hepatitis C virus expressed in mammalian and insect cells." Virology. 205. 141-150 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Simmonds, P., et al.: "A proposed system for the nomenclature of hepatitis C viral genotypes." Hepatology. 19. 1321-1324 (1994)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Miyamura, T.: "Analysis of the hepatitis C virus genome and hepatocellular carcinoma." "Primary Liver Cancer : Etiological and Progression Factors" Breshot, C.(ed) CRC Press, Inc.125-135 (1994)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Suzuki, R., et al.: "Nuclear localization of the truncated hepatitis C virus core protein deleted in its hydrophobic C-terminus." J.Gen. Virol.76. 53-61 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Aizaki, H., et al.: "Genotyping of hepatitis C virus by simple ELISA method." Clin. Diag. Virol.3. 105-109 (1995)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] suzuki, T., et al.: "Hepatitis C virus infection and hepatocellular carcinoma." Liver. in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Harada, T., et al.: "Characterization of an established human hepatoma cell line constitutively expressing nonstructural proteins of hepatitis C virus by transfection of viral cDNA" J.Gen. Virol.in press.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kakimi, K., et al.: "Helper T cell epitopes in the hepatitis C virus core region recognized by BALB/c and C57BL/6 mice." J.Gen. Virol.in press.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Harada, S., et al.: "Establishment of a cell line constitutively expressing E2 glycoprotein of hepatitis C virus and humoral responce of hepatitis C patients to the expressed protein." J.Gen. Virol.in press.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Amano, H., et al.: "Identification and characterization of thymidine kinase gene of Yaba virus." J.Gen. Virol.in press.

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      1994 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] SimmondsP.,MiyamuraT.,et al.: "Aproposed system for the nomenclature of hepatitis C vival genotypes.21GC01:Hepatology" (in press).

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] MiyamuraT.and Matsuura Y.: "Structural proteins of hepatitisC." Trends in Microbiology. 1. 229-231 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Matsuura Y.and Miyamura T.: "Molecular biology of hepatitis Cvirus." Seminars in Virology. 4. 297-304 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Ueno T.,Miyamura T.,et al.: "Immortalization of differentiated human hepatocytes by a combination of a viral vector and collagen gel culture." Human Cell. 6. 126-135 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] KimD.-W.,MiyamuraT.,et al.: "An efficient expression vector for stable expression in human liver cells." Gene. 134. 307-308 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] ShihC.-M.,MiyamuraT.,et al.: "Supression of hepatitis B virusexpression and replication by hepatitis C virus core protein in HuH-7cells." J.Virol.67. 5823-5832 (1993)

    • 関連する報告書
      1993 実績報告書
  • [文献書誌] Matsuura,Y.,Miyamura,T.,et al.: "Expression of processed envelope protein of hepatitis C virus in mammalian and insecy cells." J.Virol.66. 1425-1431 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Katayama,T.,Miyamura,T.,et al.: "Improved serodiagnosis of non-A,non-B hepatitis by an assay detecting antibody to hepatitis C virus core antigen.Evidence for immune selection of HCV putative envelope" Hepatology. 15. 391-394 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Weiner,A.J.,Miyamura,T.,et al.: "glycoprotein varriants:potential role in chronic hepatitis C virus infections" Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 89. 3468-3472 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Inoue,Y.,Miyamura,T.,et al.: "Expression of the amino-terminal half of the NS1 region of the hepatitis C virus genome and detection of antibody to the expressed protein in patients with liver disease." J.gen.Virol.73. 2151-2154 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Inoue,Y.,Miyamura,T.,et al.: "Silent mother-to-child transmission of hepatitis C virus through two generations determined by comparative nucleotide sequence analysis of the viral cDNA." J.Inf.Dis.166. 1425-1428 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書
  • [文献書誌] Kohara,M.,Miyamura,T.,et al.: "Expression and characterization of glycoprotein gp35 of hepatitis C virus using recombinant vaccinia virus." J.gen.Virol.73. 2313-2318 (1992)

    • 関連する報告書
      1992 実績報告書

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公開日: 1992-04-01   更新日: 2016-04-21  

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