| 研究課題/領域番号 |
04640680
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
動物発生・生理学
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| 研究機関 | 岡崎国立共同研究機構 |
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研究代表者 |
小川 和男 岡崎国立共同研究機構, 基礎生物学研究所, 助手 (30132731)
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| 研究期間 (年度) |
1992
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| 研究課題ステータス |
完了 (1992年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1992年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | ダイニン / モーター蛋白質 / PCR / ATP結合配列 |
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| 研究概要 |
ダイニンファミリーのなかでアクソネームダイニンの全一次構造が91年に、細胞質ダイニンが92年に解明された。いずれも分子中央に4つのATP結合部位があった。特に最初のATP結合部位周辺のアミノ酸配列には高い相同性があり、モーターファミリー間でも種を通じても保存されていた。そこで哺乳類のアクソネームタイプのダイニンβ重鎖cDNAを分離する目的でウニダイニンβ重鎖のTDRCY(1068-1072)配列に相当するオリゴヌクレオチドとFITMNPGY(1188-1195)配列に相当するアンチセンスオリゴヌクレオチドを合成した。この2つのプライマーとマウスの精巣のcDNAを用いてDNA増幅反応(PCR)を行なった。できたDNAをT-ベクターにつなげヌクレオチド配列を決定した(図参照)。増幅されたDNAにはウニ精子ダイニンβ重鎖のATP結合配列があったのでマウスのアクソネームダイニンのβ重鎖が増幅されたと判断した。したがってこのプライマーを使えば鋳型DNAに依存してダイニンのβ重鎖cDNAやジェノミックDNAをPCR法によって増幅させることが可能となった。
Query: 1 TDRCYRTLFGALHLHLGGAPEGPAGTGKTETTKDLAKAVAKQCVVFNCSDGLDYLALGKF 60 TDRCY TL +LHL ++GAP GPAGTGKTETTKDL++A++ VFNCS+ +DY + G+ Sbjct: 1068 TDRCYITLTQSLHLVMSGAPAGPAGTGKTETTKDLGRALGIMVYVFNCSEQMDYKSCGNI 1127 Query: 61 FKGLISCGAWACFDEFNRIDLEVLSVVAQQILTIQRGINAGTELLVFEGTELKLDPTCAV 120 +KGL GAW+CFDEFNRI +EVLSVVA Q+ +Q +I E F G E+ L P+ ++ Sbjct: 1128 YKGLAQTGAWGCFDEFNRISVEVLSVVAVQVKCVQDAIRDKKERFNFMGEEISLIPSVGI 1187 Query: 121 FITMNPGY 128 FITMNPGY Sbjct: 1188 FITMNPGY 1195
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