| 研究課題/領域番号 |
04660086
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用生物化学・栄養化学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
伏木 亨 京都大学, 農学部, 助教授 (20135544)
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| 研究分担者 |
井上 和生 京都大学, 農学部, 助手 (80213148)
河田 照雄 京都大学, 農学部, 助手 (10177701)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
1993年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1992年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 消化管ホルモン / ハイブリドーマ / 小腸幹細胞 / CCK / 融合細胞 / 内分泌細胞 |
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| 研究概要 |
本研究では、増殖能を持つ小腸幹細胞と消化管ホルモン産生細胞とのハイブリドーマを作成する目的で、小腸幹細胞からチミジン要求変異株を作成すること、消化管ホルモン産生細胞をできるだけ高度に精製することを試みた。
ハイブリドーマを選択培養するために、チミジル酸シンターゼ欠損変異株を作成した。チミジン、テトラヒドロ葉酸、メトトレキセートを含む選択培地でチミジン要求性IEC-6変異株を得ることができた。この細胞の増殖速度は、もとのIEC-6の増殖速度とほとんど同じであった。チミジンを含まない培地で培養すると、1週間でほとんど死滅した。すなわち、得られた細胞がチミジン要求性であることが確かめられた。
消化管ホルモン産生細胞を精製する目的で、ラットの小腸をコラゲナーゼとデスパーゼによって分散した後、40%パーコールを用いた密度勾配遠心で分画することによって、CCK産生細胞が濃縮されている画分を得ることができた。この標品は、弱いながらCCK放出ペプチドに対するCCK放出能を持っていた。顕微鏡観察によると、ホルモン産生細胞以外の細胞がまだ含まれていることが明かとなったので、さらにセルソーターによる精製を進めている。
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