| 研究課題/領域番号 |
04660088
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用生物化学・栄養化学
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| 研究機関 | 島根大学 |
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研究代表者 |
落合 英夫 島根大学, 農学部, 教授 (10032971)
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| 研究分担者 |
芦田 裕之 島根大学, 遺伝子実験施設, 助手 (70231909)
澤 嘉弘 島根大学, 農学部, 助教授 (70127489)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
1993年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1992年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | アオコ / Microcystis aeruginosa / プラスミドDNA / ローリング サークル / 塩基配列決定 / ラン藻 / シアノバクテリア / アオコ現象 / 遺伝情報解析 / ローリングサークル / 塩基配列 / 分子生物学 / replication protein / Cyanobacteria |
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| 研究概要 |
1.ラン藻(シアノバクテリア)Microcystis aeruginosaより、その大プラスミドpMA2を純粋に単離し、クローン化後その制限酵素地図を完成した。さらにその全塩基配列の決定に成功した。pMA2は全塩基数4993bpであり、そのGC Contentは42.2%であった。(DDBJ Accession No.D17448:登録済み)。また細胞内におけるpMA1とpMA2の量的比率はおよそ6:1と計測された。pMA2とpMA1の塩基配列間には高い相同性を示す領域は見いだされなかった。
2.データーベースによる検索の結果から、pMA2には、その正鎖、逆鎖にそれぞれ1個のORFの存在が認められたが、それらの仮想タンパク質と高い相同性を示すタンパク質は見出されなかった。またpMA1に於て確認されたreplication proteinに相当する配列も存在していなかった。しかし複製に必須なnicking siteの塩基配列として、pMA1に共通する配列(CTTG(!)ATT)の存在が確かめられた。
3.pMA1(2287bp)にはグラム陽性菌であるBacillus sp.Lactobacillus sp.のプラスミド類が有するreplication proteinと相同性の高い領域、Ori領域及び複製開始点が存在していた。この検索結果に基づいてpMA1の複製機構を調べた。pMA1を菌体より抽出後、S1 nuclease処理、Agarose gel電気泳動、Nylontransfer membrane移送及びそれぞれのプラスミドプローブによるHybridization実験の結果からpMA1は明らかにRolling Circle Replication機構に従って複製される事が証明された。現在このreplication proteinの証明を進めている。
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