研究課題/領域番号 |
04670028
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研究種目 |
一般研究(C)
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配分区分 | 補助金 |
研究分野 |
解剖学一般
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研究機関 | 関西医科大学 |
研究代表者 |
久保田 真理 関西医科大学, 医学部, 講師 (60121901)
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研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1992年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
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キーワード | 細胞分裂 / 卵割構 / 二次元電気泳動 / 母系効果突然変異 / モノクローナル抗体 / ウエスタンブロッティング / アフリカツメガエル / 小麦胚芽レクチン / 卵割 |
研究概要 |
アフリカツメガエルの戻し交配により得られた母系効果突然変異(af)雌が産む卵(af卵)では、卵割溝の収縮が阻害されているために細胞質分裂は起こらない。この突然変異を利用して、胚細胞に特異的な細胞質分裂機構の一端を明らかにすることが本研究の目的である。本研究により以下の成果が得られた。 1.af卵細胞質中には野生型卵細胞質中に存在する、分子量78kDa、等電点7.6の蛋白が欠損している。二次元電気泳動ゲル上の78kDaのスポット100個分を集めて濃縮後、アミノ酸自動分析器でN末端の20のアミノ酸配列を調べたところ、相同な配列は既知の蛋白にはなく、この蛋白は新しい種類の蛋白であることがわかった。 2.この蛋白に対するモノクローナル抗体を作製し、これを用いて卵構成蛋白のWestern blottingを行った。この抗体はaf卵では、78kDa付近の一本のバンドとしか反応しなかったが、野生型卵では、二本のバンドと反応するものと三本のバンドと反応するものが存在した。この蛋白の卵割溝収縮との直接的関係はまだ証明できていない。 3.78kDa付近に分子量をもち、卵割に関係することが知られている、ezrin、radixin、およびmoesinは、78kDa蛋白とは別のものであることがWestern blottingにより明らかになった。 4.小麦胚芽レクチンで処理した野生型卵は、af卵と極めてよく似た形態を呈したので、小麦胚芽レクチン結合蛋白の野生型卵とaf卵での違いを調べたところ、af卵では205kDaの蛋白が欠損しており、34kDa付近の蛋白にも差が見られた。今後、これらの蛋白についても解析する予定である。
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