| 研究課題/領域番号 |
04670136
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
医化学一般
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
石井 哲郎 筑波大学, 基礎医学系, 助教授 (20111370)
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| 研究分担者 |
坂内 四郎 筑波大学, 基礎医学系, 教授 (70019579)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | シスチン / ストレスタンパク質 / アミノ酸輸送 / cDNA / マクロファージ / グルタミン酸 |
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| 研究概要 |
マクロファージmRNAの1、5-3kb長の画分を用いて、方向性を持ったcDNAライブラリーを作製した。まず、ストレス剤で誘導されるクローンを、約20000ファージプラークの中より、126個選別した。これらの誘導クローンを相互ハイブリで分類し、塩基配列の一部を解析した。その結果、ヘムオキシゲナーゼ、CD36、MSP23に加えて新たに、IL1リセプターアンタゴニスト前駆体、IFN-γ誘導タンパク204をコードするクローンが得られた。後2種のクローンについては、単に「培養刺激」によって誘導されるものと予想された。さらに、ストレス刺激剤で誘導されるものとして、メタロエラスターゼと、未知のタンパクをコードするA170クローン群が得られた。クローンA170については、cDNAの全塩基配列を決定したところ、39kDaのタンパクをコードしていると予想されたが卵母細胞でシスチン輸送活性の発現は、見られなかった。以上の結果を踏まえ、シスチンキャリアーのクローンをさらに検索するために、上記主要5種以外のクローンを約700選別した。この700クローンをまとめて活性発現のアッセイを行ったが、卵母細胞にシスチン輸送活性の発現は見られなかった。
以上のごとく、本プロジェクト期間内には当初目標としていたcDNAクローンの単離には至らなかった。しかしながら、本プロジェクトの研究過程で新しいストレスタンパク質ファミリーの一員であるMSP23のクローニングに成功したことと、CD36とメタロエラスターゼがストレス剤によって誘導されること(未発表)を明らかにした。さらに、クローンA170等、未知の数種類のストレス誘導クローンが得られた。
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