| 研究課題/領域番号 |
04670362
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
法医学
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 |
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研究代表者 |
篠塚 達雄 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (70095610)
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| 研究分担者 |
原 正昭 埼玉医科大学, 助手 (50129160)
柳田 純一 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (70049790)
広瀬 忠明 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (60051405)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1993年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | DNA多型 / PCR法 / RFLP_S法 / HLADQα型 / 親子鑑定 / RFLPs法 / HLADQalpha型 / RFLP法 / HLADQα |
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| 研究概要 |
親子鑑定のHLA検査後に凍結保存しておいたリンパ球で、非アイソトープ標識プローブを用いたRFLP法によるDNA解析およびPCR法による多型解析が可能かどうかについて検討した。一般にDNAの抽出目的として、EDTAを用いた採血が用いられている。しかし、HLA検査にはヘパリン加血を用いているので、EDTA加血とヘパリン加血の試料からそれぞれDNAの抽出を行ない比較したところ、ヘパリン加血とEDTA加血との間でDNA回収量には差異が認められなかった。次いで、抽出を市販のDNA抽出キット3種類(有機溶媒を使用しないA社およびB社、マトリックスを使用するC社の製品)の方法により検討した。マトリックスを使用する方法を除いては、高収率でDNAを回収することができ、SDS-PAGEで低分子化したDNAは認められず、いずれでも高分子DNAが得ることができた。そこでA社のキットを用いて親子鑑定例におけるリンパ球からDNAを抽出し、PCR法によるHLADQαタイピングを行なったところ、充分に型判定が可能であった。
10家系の親子鑑定におけるHLA検査後のリンパ球試料からのDNAを使用し、市販の非アイソトープ(ギゴキシゲニン)標識MZ1.3プローブによるRFLP法を試みた。6家系の試料でDNAフィンガープリンティングを行なうことが可能であり、4家系の試料では明確な判定ができなかった。本法でのDNA検出限界は、アガロース電気泳動で1レーン当り約10μgのDNA量が必要であり、検出感度が充分ではなかった。別の市販の非アイソトープ(蛍光)標識プローブ(NICEプローブ)を用いたRFLP法を試みたところ、試料量は約1μgと少量でDNA多型解析が充分可能であった。さらにこの10家系のDNA試料をPCR法での解析に適用したところ、HLADQaタイピングおよびDIS80分析による多型解析のいずれも充分に可能であることが証明できた。
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