| 研究課題/領域番号 |
04670709
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
精神神経科学
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| 研究機関 | 慶応義塾大学 |
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研究代表者 |
工藤 純 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (80178003)
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| 研究分担者 |
浅川 修一 慶應義塾大学, 医学部, 助手 (30231872)
蓑島 伸生 慶應義塾大学, 医学部, 講師 (90181966)
清水 信義 慶應義塾大学, 医学部, 教授 (50162706)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1992年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | 21番染色体 / EPM1 / エキソントラッピング / 遺伝病 / YAC / ミオクローヌスてんかん / コスミド / BAC / 進行性ミオクローヌスてんかん / 遺伝疾患 / 第21染色体 / コスミドライブラリー / コンティグ / 染色体ソーティング / FISH |
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| 研究概要 |
CEPHの第21染色体特異的整列YACライブラリーから、EPM1領域(21q22.3 : D21S19-PFKL-CD18)のYACを単離した。7種類のSTSを用いてPCRスクリーニングを行い、12個のYACクローンをこの領域から単離することができた。ただし、連鎖不平衡からEPM1に最近接していると予想されているPFKLは調べた13クローン中1クローンのみにしか確認されず、これより遠位側のD21S400、D21S171は調べた全てのYACクローンに含まれていなかった。これらの結果は、この領域のDNAがYACにクローニングされた時に非常に不安定であるために生じたものと思われるが、いずれにせよCEPHのYACコンティグにはギャップがあることは確かである。YAC-DNAを直接プローブとして用いることにより、平成4年度に染色体ソーティングにより作成した第21染色体特異的コスミドライブラリー(約10600クローン : 6ゲノム相当)から調製した高密度レプリカフィルター(1536クローン/フィルター)をスクリーニングした。合計371個のコスミドが同定された。さらにEPM1領域のマーカーD21S25等を含むコスミドも単離し、これらを起点としてウォーキングを行った。また独自に作製したBACライブラリー(平均110kb : 3ゲノム相当)も用いてD21S1458-D21S25-PFKL-D21S154-D21S171を含む1.2Mbのコンティグを17個のBACと98個のコスミドを用いて作成した。さらにエキソントラッピングによる未知遺伝子の探索を行い、16個の未知遺伝子由来のエキソンを発見し、EPM1の候補遺伝子KNP1、KNP3、KNP4等を単離した。
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