| 研究概要 |
心疾患成因の解明と予知,発見と治療法確立の努力を行う上で,心筋興奮・伝導を担う分子レベルの解析と知見を得ることは不可欠である。本研究では心筋機能を担う分子のうち,心室筋形質膜のCa^<2+>チャンネルとNa^+チャンネル,さらにATP感受性K^+チャンネルを対象とし,生物有機化学的,免疫化学的,電気生理学的アプローチによって,この幅広い研究分野をつなぐ分子ツールを確立し,不整脈病因の解明に資しようとした。以下に2年間にわたる研究成果の概要を述べる。
1.Ca^<2+>チャンネルの拮抗薬結合部位の同定:新規に合成したジヒドロピリジン誘導体,ジアジピンを用いた光アフィニテイラベル法によって,我々は既に骨格筋チャンネルの同薬物結合部位を同定しているが,この実験手法を心筋Ca^<2+>チャンネルにも適用して解析した。その結果,結合部位は骨格筋の場合同様,リピートIIIのS5-S6リンカー部と,リピートIVのS6を含む部分であるが,両チャンネルの間には数箇所アミノ酸置換が起っていることが判明した。これが同一薬物群に対しても両チャンネルでは10倍親和性がちがう大きな要因であると考察した。
2.ATP-K^+チャンネル候補タンパクの単離:同チャンネルの特異的阻害剤グリベンクラミドの化学構造を有する新しい試薬を合成した。これを用いた光アフィニテイラベルを行い,それを手掛りにした精製を行った結果,分子量55をDaのタンパク質を単離し,その部分構造を明らかにした。蛍光抗体法で本タンパク質が心窒筋の細胞膜表面に局在することが確認できた。また本チャンネル開口剤の基本骨格を有するいくつかの化合物を合成し,その作用を電気生理学的に調べた。。
3.Na^+チャンネルの抗不整脈薬結合部位解析をめざして:代表的クラスI抗不整脈薬メキシレチンをリード化合物とする光アフィニテイラベル用試薬とハプテン抗体産生用の誘導体を合成した。
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