| 研究課題/領域番号 |
04671411
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| 研究種目 |
一般研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用薬理学・医療系薬学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
大杉 武 大阪大学, 医学部, 助手 (50176880)
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| 研究期間 (年度) |
1992 – 1993
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| 研究課題ステータス |
完了 (1993年度)
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| 配分額 *注記 |
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1993年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1992年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
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| キーワード | 薬物耐性 / 薬物依存 / モルヒネ / 1本鎖DNA / DNA結合蛋白質 / cAMPレスポンスエレメント / マウス / 小脳 / 薬物耐性依存 / 遺伝子発現 / cAMP response ehement(CRE) |
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| 研究概要 |
強力な鎮痛薬であるモルヒネは慢性投与により、耐性、依存を生じることが知られているが、これらの耐性、依存や逆耐性現象の分子機構は明らかではない。我々は既に、ソマトスタチン遺伝子のプロモーター領域のサイクリックAMP response element(CRE)を含むオリゴDNAをプローブとしてゲルシフトアッセイを行ない、神経細胞由来のNG108-15細胞の核抽出液中に、モルヒネの長期処理により変化するDNA結合蛋白質が存在することを見いだしたそこで、よりin vivoに近い系としてマウスを用いて、このモルヒネにより変化するDNA結合蛋白質(sCRE-BP)のマウス脳内での分布、その性質及び精製を行った。sCRE-BPの結合活性は脳の各部位に見られた。モルヒネ慢性投与を行ったマウス小脳において、sCRE-BPの結合活性が著しく減少した。しかし、他の部位では有意な差が見られなかった。同じ核抽出液を用いて、2本鎖CRE結合蛋白質の結合活性を調べたが、モルヒネ投与によって影響を受けなかった。つぎに、このsCRE-BPの精製を行った。sCRE-BPはDNAアフィニティカラムとMonoQカラムを用いて、約13000倍精製し、SDS-PAGE上で、分子サイズが35-40kDaの二本のポリペプチドバンドを検出した。次に、この蛋白質をペプチダーゼで分解し、4種類のペプチドのアミノ酸配列を決定した。これらのペプチドをもとにPCRのためのディジェネレートプライマーを合成し、mouse brain cDNAをPCR法により増幅した。PCR産物を用いて、λgt10 mouse brain cDNA libraryをスクリーニングし、クローンを得た。これらのクローンをシークエンスしているが、現在のところ、既知の蛋白質とのホモロジーは見いだされず、新しいDNA結合蛋白質であると思われる。この蛋白質の機能はまだ不明であるが、モルヒネ長期投与により、DNA結合活性が変化することから、モルヒネの耐性依存現象に深く関与していると考えられる。
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