| 研究概要 |
1.ヒトの肝ミクロゾームより,脂肪酸ω水酸化酵素(P450HLω)を15nmol P450/mg蛋白質の比含量に迄精製した。本P450HLωはSDS-PAGE上,52,000の見かけの分子量を示した。更にヒトの肝cDNAライブラリーより,ウサギの脂肪酸ω水酸化酵素(CYP4A5)のcDNAをプローブとして,脂肪酸ω水酸化酵素のcDNAクローンを単離した。このcDNAから推定されるアミノ酸残基5から25迄の配列は,未決定の一残基を除いてP450HLωのN末端配列と同一であった。このcDNAは519個のアミノ酸から成る分子量59,347の蛋白質をコードした。本cDNAより推定されるアミノ酸配列はCYP4A5と82%の相同性を示した。ノーザンブロット分析の結果,このcDNAにハイブリダイズするmRNAはヒトの肝臓と腎臓に発現することが認められた。発現ベクターpAAH5を用いて本cDNAを酵母に発現させた蛋白質は,見かけの分子量約52,000で種々の脂肪酸のω水酸化反応を触媒した。これよりこのcDNA(CYP4A11)はヒト肝脂肪酸ω水酸化酵素P450HLωに相当することが証明された。
2.ヒト好中球のcDNAライブラリーより,ウサギのプロスタグランジンω水酸化酵素(CYP4A4)のcDNAをプローブとして,ロイコトリエンB_4ω水酸化酵素(P450LTBω)のcDNAを単離した。本cDNAによりコードされる酵素は520のアミノ酸残基よりなり,分子量は59,805である。本酵素を酵母内に発現させたところ,ロイコトリエンB_4のω水酸化を触媒し,そのKm値は0.71μMであった。本酵素のアミノ酸配列は脂肪酸やプロスタグランジンω水酸化酵素(CYP4A)と42-43%の相同性を示し,P450遺伝子スーパーファミリーにおいてファミリー4の中の新しいサブファミリー4F(CYP4F3)の一員であることが明かになった。
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